 Introduction

Le développement de nouvelles formulations anticancéreuses est un défi prioritaire en biomédecine. Environ 10.000 composés ayant une activité antitumorale sont testés chaque année [1]. De plus, plusieurs particules nano-et micrométriques ont été proposées comme systèmes de délivrance (liposomes, nanoémulsions, microcapsules polyélectrolytiques, particules métalliques, etc.). Ces systèmes de délivrance protègent les médicaments d'une dégradation prématurée tout comme ils peuvent les vectoriser vers des tumeurs. Toutefois, seulement 6,7% de préparations antitumorales entrent en phase clinique I et font l'objet d'une approbation par la FDA [2]. C'est environ deux fois moins que le taux habituel rencontré avec d'autres principes actifs (non antitumoraux).

Ces chiffres confirment la faible valeur pronostique des méthodes d'essai in vitro en tant que techniques d'évaluations in vitro pour des principes actifs antitumoraux.

Pour sélectionner les formulations les plus prometteuses, des modèles in vitro basés sur des cultures cellulaires bidimensionnelles en monocouches (2D) sont couramment employés. Ces modèles ont cependant leurs limites et c'est la raison pour laquelle des systèmes in vitro tridimensionnels (3D) sont développés afin de mimer les tumeurs solides [3]. L'utilisation de cellules en culture 2D conduit celles-ci à une exposition à des concentrations uniformes en oxygène et en éléments nutritifs alors que dans les tumeurs solides les cellules sont exposées à des conditions de gradient des facteurs essentiels.

De plus, la chimiothérapie peut être facilement délivrée aux cellules cibles dans le cas de cultures de cellules sous forme de monocouches alors qu'in vivo les principes actifs doivent pénétrer/diffuser au travers de plusieurs couches de cellules. En conclusion, la croissance de cellules dans des cultures 3D permet de mieux appréhender la réalité d'un traitement comparé à celle observée dans le cas de mise en oeuvre de cultures cellulaires sous forme d'une monocouche [4]. Les imperfections mentionnées ci-dessus quant à l'utilisation de monocouches cellulaires ont comme conséquence une sensibilité réduite aux agents chimiothérapeutiques lorsque des cultures cellulaires 3D sont envisagées comparées à la culture de monocouches cellulaires.

Les sphéroïdes multicellulaires tumoraux (SMT) sont des agrégats 3D sphériques denses qui pourraient imiter les tumeurs solides de petites tailles et simuler les interactions cellule-cellule ainsi que le microenvironnement cellulaire [5]. Les SMT ont été décrits pour la première fois dans les années soixante-dix par Sutherland [6] et utilisés depuis dans l'étude de la biologie des tumeurs, de l'impact des rayonnements sur les cellules, de l'influence de la photodynamique et des chimiothérapies. Plusieurs techniques ont été proposées pour former des SMT, telle que l'agrégation spontanée, les flacons tournants, des systèmes de culture cellulaire mis en rotation, des systèmes à base de gouttes pendantes, des systèmes de plateaux avec de faibles adhésions et la microencapsulation dans des microcapsules de polyélectrolytes [7]. Cependant, bon nombre des techniques mentionnées ci-dessus présentent des difficultés de mise en pratique et ce, dû à un manque de rapidité, de reproductibilité, de simplicité et de rendement. Une nouvelle approche permettant de former des sphéroïdes tumoraux comme résultat d'une auto-aggrégation en présence de peptides, contenant un motif RGD (L-arginine, glycine, et L-acide aspartique) a été proposée dans cette dissertation doctorale en tant que solution possible à ce problème.

Le but de la thèse de doctorat était de développer une technique permettant une très bonne reproductibilité pour la formation de SMT et de démontrer la possibilité d'utilisation de ces sphéroïdes 3D comme modèles in vitro.

Plus spécifiquement, les approches suivantes ont été réalisées:

1. Etudier l'agrégation cellulaire induite par RGD en utilisant des lignées cellulaires de différentes caractéristiques et origines. Le mécanisme de l'effet d'auto-assemblage est probablement lié à des intégrines favorisant les interactions cellule-cellule et les interactions de la cellule-matrice.

Auparavant, le rôle de l'intégrine α5β1 dans l'agrégation cellulaire induite par la fibronectine a été démontrée [START_REF] Salmenperä | Formation and activation of fibroblast spheroids depend on fibronectin-integrin interaction[END_REF]. Nous avons utilisé le ligand K34c (10 µM) qui est fortement sélectif pour l'intégrine α5β1 [START_REF] Heckmann | Rational Design of Highly Active and Selective Ligands for the α5β1 Integrin Receptor[END_REF] comme inhibiteur concurrent de la cyclo-RGDfK (TPP). En effet, de petites concentrations de K34c 2. Techniques de Co-culture basées sur la formation de sphéroïdes tumoraux induits par RGD Il est bien connu que les tumeurs solides ainsi que les cellules malignes, impliquent des fibroblastes hôtes, des cellules endothéliales ainsi que des cellules immunitaires interagissant l'une avec l'autre ainsi qu'avec les facteurs microenvironmentaux pour conduire à la progression tumorale [7]. La contribution de cellules stromales dans le développement de cancers et de résistance aux principes actifs a été démontrée pour le cancer du sein, le gliome et le mélanome [START_REF] Dittmer | The impact of tumor stroma on drug response in breast cancer[END_REF][START_REF] Jones | Standard of care therapy for malignant glioma and its effect on tumor and stromal cells[END_REF]. L'utilisation à la fois de tissus normaux et tumoraux pourrait permettre de classer les formulations selon leur rapport efficacité / sécurité. Pour réaliser ces conditions in vitro, deux nouveaux modèles de co-culture 3D ont été développés de manière à fournir une structure bien identifiée de type « coeurécorce ». Les deux modèles ont pu être facilement fabriqués en utilisant le peptide RGD cyclique de manière à induire l'auto-assemblage cellulaire. La première approche consiste en l'association du peptide RGD avec la technique de recouvrement liquide, alors que la seconde est basée sur la co-encapsulation de sphéroïdes tumoraux (obtenus au préalable par traitement du peptide RGD) et des cellules normales dans des microcapsules de polyélectrolytes (figure 5). Une augmentation de la concentration de TMZ (>200 mM) a conduit à la désintégration des sphéroïdes suivie par la formation d'agrégats irréguliers (<50 µm). La figure 8 permet également d'observer qu'en l'absence de traitement avec un principe actif toutes les cellules sont maintenues en vie dans les sphéroïdes.

Micelles chargées avec de la curcumine

La curcumine (CUR), un composant actif principal du safran des indes (Curcuma longa), est un composé polyphénolique de faible poids moléculaire naturel avec une activité anticancéreuse prononcée. La curcumine empêche la prolifération, l'invasion, l'angiogenèse et la métastase des tumeurs par l'interaction avec de multiples cellules exprimant les protéines responsables de ces activités [START_REF] Shehzad | Molecular mechanisms of curcumin action: Signal transduction[END_REF]. Toutefois, l'utilisation de la curcumine est limitée en raison de sa faible biodisponibilité et de sa faible solubilité en milieu aqueux. De ces faits, le développement de nouvelles formulations pour assurer la mise à disposition de la curcumine est très important. L'immobilisation de la curcumine dans des systèmes nanométriques de délivrance de principes actifs permet de surmonter ces limites. L'état de l'art dans ce domaine est décrit dans de nombreux articles scientifiques de revues [START_REF] Bansal | Advanced drug delivery systems of curcumin for cancer chemoprevention[END_REF]. Cependant, la plupart des systèmes de délivrances

2 . 5 .

 25 Evaluer les propriétés des sphéroïdes (forme, taille, viabilité cellulaire) en fonction des conditions d'agrégation cellulaire induites par RGD. 3. Mettre en place une technique de co-culture de cellules tumorales et normales sous forme de sphéroïdes formés en tant que résultat d'une agrégation cellulaire induite par du RGD. 4. Proposer de nouveaux composés avec une activité antitumorale potentielle et différentes particules nano-et micrométriques destines à la délivrance de substances antitumorales. Démontrer l'intérêt des sphéroïdes tumoraux induits par du RGD en tant que modèle 3D in vitro pour tester l'efficacité de composés antitumoraux et de différents vecteurs nano-et micrométriques chargés de substances antitumorales.  Résultats et discussions 1. Agrégation cellulaire induite par le RGD en tant qu'outil pour former des sphéroïdes tumoraux multicellulaires Une nouvelle approche simple a été proposée pour former des sphéroïdes constitués de cellules tumorales basés sur des auto-assemblages cellulaires. Pour atteindre cet objectif, cinq composés contenant du RGD ont été synthétisés (tableau 1). Une liaison covalente de bromure de 4-carboxybutyl-triphénylphosphonium (TPP) sous forme cationique aux peptides est supposée faciliter l'auto-assemblage dû à l'augmentation des interactions électrostatiques. Tableau 1. Caractéristiques des composés contenant du RGD Abréviation Structure composée Masse moléculaire cyclo-RGDfK cyclique Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys 603 cyclo-RGDfK(TPP) cyclique Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys modifié avec du bromure de 4-carboxybutyltriphenylphosphonium 1029 RGDF linéaire Arg-Gly-Asp-Phe 494 TPP-RGDF linéaire Arg-Gly-Asp-Phe modifié avec du bromure de 4-carboxybutyltriphenylphosphonium 919 (TPP) 2 -KRGDF linéaire lys-Arg-Gly-Asp-Phe modifié avec du bromure de 4-carboxybutyltriphenylphosphonium 1472 L'auto-assemblage a été induit par l'addition d'un peptide cyclique Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys (cyclo-RGDfK) modifié avec du TPP directement ajouté à la monocouche de culture cellulaire. 16 lignées cellulaires de différentes origines (humaine, souris) et de divers types (carcinome, mélanome, gliome et cellules normales) ont été étudiées. 12 d'entre elles pouvaient former des SMT en présence de 10-100 µM de cyclo-RGDfK (TPP) après 2 ou 3 jours d'incubation (

  ces lignées cellulaires (mélanome humain A-375) sont données à la figure 1 (rangée inférieure). Seulement 4 lignées cellulaires (А-172, HaCaT, HOS, MCF-7 ADR) parmi les 16 lignées étudiées n'ont pas donné lieu à la formation de sphéroïdes en présence des peptides cyclos-RGDfK.

Figure 1 .

 1 Figure 1. Auto-agrégation dépendante du temps d'incubation des cellules humaines de glioblastome U-87 MG et humaines de mélanome A-375 en présence du peptide cyclo-RGDfK (TPP) dans un milieu DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) supplémenté avec 10% de sérum foetal de bovin (SFB), 72 h. Les cellules (culture sous forme de monocouche) sans traitement de peptide (0 µM) ont été employées comme contrôles.

  (10 µM) ont empêché l'agrégation cellulaire induite normalement par RGD et ce fait a permis de confirmer notre hypothèse quant à la participation d'intégrines dans l'auto-assemblage cellulaire (Figure 2). De plus, le rôle de la sialylation de surface cellulaire a été étudié quant à l'agrégation induite par RGD. Les résidus d'acides sialiques (AS) sont souvent liés aux récepteurs cellulaires, comprenant des intégrines, et changent leurs fonctions biochimiques. Pour examiner le rôle des acides sialiques sur la formation de sphéroïdes, nous avons réalisé une inhibition en utilisant de la lectine dans des cultures pour lesquelles des monocouches de cellules MCF-7 ont été traitées avec diverses lectines ciblant les AS ainsi que le peptide (TPP) cyclo-RGDfK. Les expérimentations réalisées ont permis de constater qu'un traitement préparatoire des cellules MCF-7 avec une dose-dépendante de lectines ciblant les AS réduit sensiblement la formation de sphéroïdes. En revanche, des lectines ne ciblant pas les AS n'ont exercé aucun effet inhibiteur sur l'agrégation causée par RGD. Ces résultats ont été confirmés grâce à une analyse immunologique et de viabilité cellulaire, indiquant clairement la participation de AS dans la formation de sphéroïdes.

Figure 2 .

 2 Figure 2. Inhibition de l'agrégation cellulaire induite par RGD en presence du composé K34c. Cellules M-3 de mélanomes de souris, 25 µM de cyclo-RGDfK(TPP), 72 heures.

Figure 3 .

 3 Figure 3. Distribution de tailles de sphéroïdes (A-D) et images obtenues par microscopie électronique à balayage de sphéroïdes (E-H) de cellules tumorales et de cellules normales dans du DMEM supplémenté avec 10% de sérum bovin foetal après 72 h d'incubation avec 50 µM de peptide RGDfK (TPP). La barre d'échelle est équivalente à 100 µm.

Figure 4 .

 4 Figure 4. Augmentation de la taille moyenne de sphéroïdes à base de MCF-7 en fonction du temps d'incubation. DMEM+10% FBS, 50 µM cyclo-RGDfK(TPP). La barre d'échelle est équivalente à 100 µm.

Figure 5 :

 5 Figure 5 : Schéma de préparation de deux modèles de co-culture 3D in vitro utilisant le peptide RGD pour induire la formation de sphéroïdes d'une part tumoraux et d'autre part de cellules normales.

Figure 6 .

 6 Figure 6. Images confocales de sphéroïdes tumoraux de cellules de mélanomes (DIO marquées en vert et de fibroblastes uniques L-929 (DIL-marqués en rouge) après 24 heures d'incubation. DMEM+10% FBS, 50 µM cyclo-RGDfK(TPP). La barre d'échelle représente 50 µm; une étape de formation à 15 µm, "0 µm" représente le bas du sphéroïde.

Figure 7 . 3 .

 73 Figure 7. Images confocales de sphéroïdes tumoraux obtenus à partir de cellules de mélanomes M-3 (DIO marquées en vert) et de fibroblastes uniques L-929 (DIL marquées en rouge) dans des microcapsules. DMEM+10% FBS, la barre d'échelle représente 50 µm.

Figure 8 .

 8 Figure 8. Images confocales de sphéroïdes multicellulaires tumoraux de cellules humaines de glioblastome U-87 MG : visualisation 3D d'une section transversale d'un sphéroïde (A) et dénombrement de mortalité (B-E). Les noyaux des cellules sont marqués avec le colorant Hoechst 33342 (en bleu), les cellules vivantes sont marquées avec de la calcéine AM (en vert) et les cellules mortes sont marquées avec de l'iodure de propidium (IP) (en rouge). L'observation de la section transversale des sphéroïdes n'ayant subi aucun traitement de principe actif (A) a été obtenue grâce à l'utilisation d'un microscope confocal permettant le traitement des images alors que le dénombrement des cellules mortes (B-E) a été réalisé en traitant les sphéroïdes durant 24 heures d'incubation avec du TMZ à différentes concentrations (10 mM, 50 mM, 100 mM et 150 mM). La barre d'échelle représente 50 µm.

Tableau 4 .

 4 Valeurs IC 50 des dérivés de DOX dans les sphéroïdes tumoraux.

Figure 9 .

 9 Figure 9. Accumulation des dérivés de DOX dans des cellules de MCF-7 et de MCF-7/ADR, 30 min d'incubation. Données de cytométrie de flux, 20,000 coups dans chaque échantillon.

3. 3

 3 Microréservoirs de polysaccharides chargés avec de la thymoquinone La thymoquinone (TQ) est le composant actif principal de l'huile essentielle de Nigella sativa. Ce composé est décrit pour ses effets anti-inflammatoires et anticancéreux dus à l'inhibition à la fois des métastases tumorales et à l'angiogenèse[START_REF] Schneider-Stock | Thymoquinone: fifty years of success in the battle against cancer models[END_REF]. Du fait de l'instabilité de la TQ en milieu aqueux, et en particulier à un pH alcalin, l'encapsulation dans des véhicules de délivrance de principes actifs doit permettre de protéger la TQ contre la dégradation. Récemment, une nouvelle classe des microréservoirs à base de chitosane (CS) et de gomme xanthane (XG) et obtenus par un ultrasonication à basse fréquence a été développée par le Dr. Borodina[START_REF] Borodina | Preparation of multifunctional polysaccharide microcontainers for lipophilic bioactive agents[END_REF]. Cette technique est basée sur une cavitation acoustique apparaissant pendant l'ultrasonication et induisant la production de radicaux libres fortement réactifs, principalement OH• et H•. Les radicaux réagissent avec des parties de polymères situées à l'interface entre la phase dispersée et le milieu dispersant, conduisant à la réticulation et à la formation d'une structure stable. En conséquence, la phase d'huileuse s'émulsionne spontanément dans la phase polymère aqueuse en donnant la formation d'une couche polymère réticulée à la surface des gouttelettes émulsionnées. Dans le cadre des recherches de cette thèse doctorale, des microréservoirs (MRs) constitués de chitosane/gomme xanthane ont été suggérés pour assurer la délivrance de principes actifs lipophiles anticancéreux. Pour ce faire, la TQ a été dissoute dans l'huile de soja et encapsulée dans les microréservoirs constitués de chitosane/gomme xanthane ayant un diamètre moyen de 0,5 μm (TQ-MC-0,5) et de 2 μm (TQ-MC-2) en faisant varier le rapport huile/eau (1:150 et 1:30, respectivement). Tableau 8. Valeurs moyennes de tailles et de potentiels ζ des microréservoirs en fonction du rapport d'huile/capture des MRs par des cellules de mélanomes de souris M-3 a été évaluée à la fois sur des monocouches cellulaires (2D) et sur des sphéroïdes multicellulaires tumoraux (3D) par microscopie confocale, cytométrie de flux et fluorimétrie. Afin de visualiser les réservoirs micrométriques, un rouge de Nile lipophile a été encapsulé dans le coeur huileux des microcapsules. La cytotoxicité plus élevée de l'échantillon TQ-MC-0.5 que celle de l'échantillon TQ-MC-2 était en parfaite corrélation avec une accumulation plus élevée de MC-0.5 plus élevée dans les cellules. Dans la culture cellulaire 3D de sphéroïdes multicellulaires tumoraux à la fois les préparations à base de MC-0.5 et de MC-2 se sont avérés pénétrer dans les sphéroïdes de manière dépendante du temps, avec toutefois une profondeur différente. Ainsi, on a observé que le MC-0.5 était présent dans la couche externe des sphéroïdes après 1 heure d'incubation alors qu'après 4 heures ils atteignaient déjà les cellules au centre des sphéroïdes (figures 10 A, B). Quant à l'échantillon MC-2, la profondeur de pénétration était plus faible comparée à celle de MC-0.5, particulièrement après 4 h (figure 10 D, E). De plus, les niveaux de fluorescence de l'échantillon MC-0.5 étaient deux fois plus élevés comparés à celui de l'échantillon MC-2 après 8 et 24 heures d'incubations (figure 10 F). De ces expérimentations il a pu être conclu que les vecteurs MC-0.5 étaient plus prometteurs que les vecteurs MC-2 en raison d'une capture cellulaire plus élevée dans les deux modèles 2D et 3D. Ces expérimentations ont également permis d'observer un effet antitumoral également supérieur ainsi qu'une toxicité non spécifique inférieure pour MC-0.5.

Figure 10 .

 10 Figure 10.Distribution (A-E) et accumulation (F) des microcapsules chargées de rouge de nile dans des sphéroïdes tumoraux constitués de cellules tumorales M-3 : tracés des surfaces des sphéroïdes traités avec des échantillons VM-0.5 (A-C) et VM-2 (D, E) après 1 et 4 h d'incubation et données de fluorimétrie de la capture des MRs par les cellules constitutives des sphéroïdes (F). Les noyaux des cellules ont été marqués avec le colorant Hoechst (bleu). Les données de fluorimétrie sont exprimées en pour cent d'intensité de fluorescence comparée à celle obtenue avec des MRs dans la suspension du milieu de culture

Figure 11 .

 11 Figure 11. Accumulation de nanoémulsions dans des sphéroïdes multicellulaires tumoraux après 4 heures d'incubation. L'importance de la fluorescence a été évaluée en traitant les images confocales

Figure 12 .

 12 Figure 12. Accumulation de nanoémulsions constituées de vésicules d'une taille de 34 nm dans des sphéroïdes multicellulaires tumoraux (SMT) formés à partir de cellules U-87 MG. Pour la realisation de l'analyse quantitative, la fluorescence moyenne de l'image est divisée par la fluorescence des nanoémulsions. La fluorescence a été mesurée avec un programme image J.

Figure 13

 13 Figure 13. Accumulation de nanoémulsions constituées de vésicules de 34 nm dans des sphéroïdes multicellulaires tumoraux (SMT) formés à partir de cellules U-87 MG et MCF-7. * p<0.05 (test U de Mann-Whitney).

Table 2

 2

	contraire, les protéines naturelles de la matrice extracellulaire (MEC) favorisent l'auto-
	agrégation de cellules et promeuvent la formation compacte de sphéroïdes [9]. Ainsi,
	suite à ces observations, nous avons pu conclure que le cyclo-RGDfK (TPP) peut imiter
	les protéines naturelles de la matrice extracellulaire en termes d'agrégation cellulaire
	voire de l'augmenter.
	Tableau 2. Génération de sphéroïdes induits par l'utilisation de peptides cycliques de
	types RGD dans des cultures monocouches, 72 heures d'incubation, DMEM + 10% FBS.

). Cette observation est d'un grand intérêt, puisque des peptides de types RGD habituellement linéaires sont connus pour empêcher la formation d'agrégats de cellules lorsqu'ils sont ajoutés au milieu

[8]

. Au

Lignées cellulaires La minimale concentration du peptide, µM

	сyclo-RGDfK 25 25 50 50 50 50 50 50 100 100 Il est intéressant de noter que 9 des 12 lignées cellulaires ont donné lieu à la formation сyclo-RGDfK(TPP) U-87 MG 10 M-3 10 HCT-116 10 PANC1 25 MCF-7 25 MCF-7 TMX 25 HepG2 25 A-375 25 L-929 25 BNL-CL2 50 de sphéroïdes tumoraux bien définis de formes rondes et denses. Ces lignées cellulaires sont mentionnées dans le tableau 2 en caractères gras. Les micrographies d'une de ces lignées cellulaires (glioblastome humain U-87 MG) sont donnés à la figure 1 (rangée supérieure). Trois autres lignées cellulaires (А-375, PANC1, PANC1-GemR) ont donné lieu à la formation d'agrégats moins réguliers. Ces lignées cellulaires sont mentionnées 50 PANC1-GemR dans le tableau 2 avec une police de caractères en italiques. Les micrographies d'une de

  sur l'encapsulation physique de la curcumine dans des vecteurs de médicaments alors que la conjugaison covalente est une nouvelle approche. A travers les travaux de recherches de cette dissertation doctorale, des conjugués de curcumine ont été proposés avec des copolymères à blocs biodégradables de Pluronic pour la délivrance du principe actif. Au total, 4 conjugués ont été synthétisés. Cependant, presque tous ces composes ont été caractérisés par une faible encapsulation de curcumine. Seul le composé MC-17 (conjugué de CUR avec Pluronic F-68) contenait environ 4% en poids de CUR alors que 9 % en poids étaient le maximum qui pouvait être attaint. De ce fait, seul le conjugué MC-17 a été choisi pour poursuivre les recherches in vitro. Les experimentations ont permis de mettre en avant que le composé MC-17 se dissout aisément en milieu aqueux à des concentrations allant jusqu'à 600 µM (au moins) et qu'il donne lieu à la formation de micelles avec des tailles moyennes allant de 100 à 600 nanomètres selon d'une part la concentration en MC-17 et d'autre part selon que les micelles contenant du MC-17 étaient localisées dans des organelles cellulaires (lysosomes ou mitochondries), alors que la CUR libre était accumulée dans le cytoplasme. La littérature scientifique mentionne que la formulation de DOX avec du Pluronic P85 peut surmonter la résistance multidrogue chez des cellules de type MCF-7/ADR par leur localisation dans les mitochondries[START_REF] Minko | Pluronic block copolymers alter apoptotic signal transduction of doxorubicin in drugresistant cancer cells[END_REF].

	8 97.2 183.2 101.1 171.1 Tableau 6.Valeurs IC 50 de micelles МС-17 et de CUR libre dans des cultures cellulaires DOX-AMG DOX-TPP sous forme de monocouche (2D). IC 50 , µМ CUR MC-17 24 h 48 h 72 h 24 h 48 h 72 h U-87 MG 38.1 36.3 30.2 159.0 141.5 55.0 MCF-7 29.1 9.2 5.4 110 48 21.5 proposés sont basés Tableau 5. Tailles moyennes des micelles MC-17 en fonction de la concentration de MCF-7/ADR 90.6 52.3 59.8 33.7 18 16.4
	CUR-F68 et de la température du PBS (pH 7,4).
	MC-17 concentration, mg/ml	Température (°C)	Taille moyennee, nm	IPD
	0.01			25			273.3	0,46
	0.1			25			254.6	0,31
	1 Tableau 7. Valeurs d'IC 50 de micelles МС-17 et de CUR libre dans des cultures 25 107.3 0,57
	0.01 cellulaires de sphéroïdes tumoraux (3D).	37			603.8	0,50
	0.1			37	IC 50 , µМ	401.9	0,37
	1	24 h	CUR 48 h	37 72 h	24 h	292.7 MC-17 48 h	0,37 72 h
	Les experimentations ont permis de mettre en évidence que les micelles étaient moins U-87 MG 157.5 123.0 94.1 454.7 360.0 197.4
	efficaces à l'égard des cellules sauvages de types MCF-7 et d'U-87 MG comparées au MCF-7 167.8 135.3 126.1 494.2 339.8 224.3
	CUR libre, mais plus toxiques vis-à-vis des cellules résistantes MCF-7/ADR (tableau 6).

la température (tableau 5). Des micelles avec une taille moyenne d'environ 100 nanomètres (1 mg/ml, 25°C) ont été réalisées pour mettre en place les essais sur les cultures cellulaires en 2D et en 3D. La technique d'agrégation cellulaire causée par la présence de RGD a été mise à profit pour obtenir des sphéroïdes tumoraux dans le cadre de ces recherches. Une efficacité plus élevée des micelles contenant MC-17 à l'égard des cellules de types MCF-7/ADR pourrait être expliquée par une accumulation cellulaire en MC-17 plus élevée, due au passage facilité au travers des protéines de MDR. Toutefois, les données de cytometrie de flux n'ont pas permis de confirmer cette proposition. D'autre part, il a pu être démontré Malheureusement, les micelles contenant du MC-17 ne peuvent pas vaincre la résistance médicamenteuse présente dans les sphéroïdes tumoraux et étaient moins efficaces à l'égard des sphéroïdes multicellulaires tumoraux constitués des cellules MCF-7 et U-87 MG comparées à la curcumine libre (tableau 7). Le taux d'accumulation de micelles MC-17 était également plus faible que le taux de CUR libre (données de cytometrie de flux). Il aurait été intéressant de tester les micelles contenant du MC-17 en utilisant des sphéroïdes multicellulaires tumoraux constitués de cellules de type MCF-7/ADR. Néanmoins, cette lignée cellualire ne donne pas lieu à la formation de sphéroïdes multicellualires tumoraux par la technique d'agrégation cellulaire induite par le peptide RGD.