Yse Jagailloux
email: yse.jagailloux@chu-brest.fr

Xavier Duval

Fabienne Le Saos

Amelie Rouille

Vincent Constantin

Jean-Michel Gaulier

Jean Luc Carre

Ysé Jagailloux¹

Xavier Duval¹

Fabienne Le Saos¹

Amélie Rouille¹

Vincent Constantin²

Jean Luc Carre¹

Qtc prolongation after consumption of nps: about a case

Keywords: NPS, QTc, 3-FPM, 4-MeO-PCP

teaching and research institutions in France or abroad, or from public or private research centers.

Résumé

Les rares cas décrits retrouvent des concentrations dans le sang total de l'ordre de 2400 et 2770 µg/L [START_REF] Adamowicz | 3-Fluorophenmetrazine a new psychoactive substance on the polish drug market[END_REF]. L'étude de Grumann et coll, retrouve une concentration sérique de 210 µg/L, 2,5 heures après une ingestion unique de 100 mg de 3-FPM chez un homme de 73 kg. La demi-vie était de l'ordre de 8,80 heures. Le 3-FPM était détectable dans le sérum pendant 82 heures et pendant 116 heures dans les urines [START_REF] Grumann | Method validation and preliminary pharmacokinetic studies on the new designer stimulant 3-fluorophenmetrazine (3-FPM)[END_REF]. Bäckberg et coll décrivent une série de cas dans lesquels, après une consommation de 3-FPM, les concentrations sériques allaient de 2,70 à 1416 µg/L et les effets indésirables rencontrés étaient principalement des tachycardies, des convulsions, de l'anxiété [START_REF] Bäckberg | Adverse events related to the new psychoactive substance 3-fluorophenmetrazine-results from the Swedish STRIDA project[END_REF]. Les concentrations urinaires allaient de 8,2 à 30857 µg/L (moyenne à 7431 µg/L) [START_REF] Bäckberg | Adverse events related to the new psychoactive substance 3-fluorophenmetrazine-results from the Swedish STRIDA project[END_REF]. Plusieurs cas de troubles de la conduction cardiaque après consommation de psychostimulants sont décrits dans la littérature. La consommation d'amphétamines ou de methamphétamines entraine le plus souvent des tachycardies mais peut également provoquer des allongements du QTc, des syndromes coronariens aigus voire des arythmies [START_REF] Bazmi | Cardiovascular complications of acute amphetamine abuse: cross-sectional study[END_REF]. Récemment une étude de Zwartsen et coll a montré une action directe de l'amphétamine sur les cardiomyocytes avec une action sur les canaux sodiques et hERG [START_REF] Zwartsen | Cardiotoxicity screening of illicit drugs and new psychoactive substances (NPS) in human iPSC-derived cardiomyocytes using microelectrode array (MEA) recordings[END_REF]. La consommation de cocaïne peut être à l'origine d'allongement du QTc, notamment via l'inhibition de l'activation des canaux hERG, diminuant le courant potassique repolarisant, prolongeant ainsi le potentiel d'action ventriculaire et l'intervalle QTc [START_REF] O'leary | Inhibition of human ether-a-go-go potassium channels by cocaine[END_REF][START_REF] Ferreira | Effects of cocaine and its major metabolites on the HERG-encoded potassium channel[END_REF]. Les canaux hERG, sont constitués de 4 sousunités monomériques contenant chacune 6 domaines transmembranaires (S1 à S6).

Les domaines S1 à S4 constituent les domaines sensibles au voltage et sont liés au domaine du pore (S5 et S6). Les 4 sous-unités s'assemblent au niveau des domaines du pore pour former la porte, permettant la sortie des ions potassium. Au vu de la taille de la cavité de son pore, plus importante que pour les autres canaux Kv, le canal hERG est particulièrement sensible au blocage par les xénobiotiques [START_REF] Tardy | Etude des mécanismes de régulation des canaux potassiques à deux domaines P[END_REF]. Ainsi, il a été décrit, dans une étude de Zhang et coll sur Xenopus oocyte, un blocage des canaux hERG par la kétamine, molécule dont dérive la 4-MeO-PCP [START_REF] Zhang | Blockade of the human ether-a-go-go-related gene potassium channel by ketamine[END_REF].

De plus, Singh et coll ont rapporté un allongement du QTc chez un patient hospitalisé, après injection de kétamine et préconisent un monitoring ECG chez les patients ayant des antécédents de pathologies cardiaques [START_REF] Singh | Ketamine-induced QTc interval prolongation[END_REF]. La phenmétrazine, molécule dont est dérivée la 3-FPM est connue pour être un inhibiteur faible des canaux hERG [START_REF]'entrée du patient aux urgences[END_REF].

Il est légitime de penser que la consommation combinée de deux stimulants tels que

  Nous rapportons le cas d'un allongement du QTc à la suite de la consommation concomitante de 3 FPM et de 4-MeO-PCP. Un homme de 60 ans, polytoxicomane s'est présenté aux urgences en avouant une prise de « wonka ». Agité, il présentait un myosis bilatéral. La fréquence cardiaque était à 54 bpm, et la tension artérielle à 101/54 mmHg bien tolérée. Les anomalies du bilan biologique consistaient en des CPK augmentées à 1900 U/L associées à une troponine à 287 ng/L. L'électrocardiogramme (ECG) réalisé dans le service des urgences révélait un intervalle QTc allongé à 543 ms. Des analyses toxicologiques qualitatives et quantitatives ont été réalisées (sang total, urine et 2 pailles retrouvées au domicile du patient) par LC-MS/MS (Xevo TQ-S, Waters) après extraction liquide-liquide. Les analyses sanguines ont révélé la présence de 3-FPM à 1990 µg/L, de 4-MeO-PCP à 36,3 µg/L, de diazépam et ses métabolites et de la buprénorphine à concentrations non toxiques. Dans l'urine, le 3-FPM et la 4-MeO-PCP ont été quantifiés à 65900 µg/L et 1080 µg/L. L'épisode d'allongement du QTc s'est résolu en 3 jours, sans complication. Le patient ne présentait pas d'antécédents cardio-vasculaires particuliers, et un ECG réalisé en 2008 était normal. Le diagnostic retenu est celui d'allongement du QTc à la suite d'une prise de psychostimulants. Mots-clefs: NPS, QTc, 3-FPM, 4-MeO-PCP. Introduction La problématique des nouveaux produits de synthèse (NPS) est en perpétuelle extension ces dernières années. En effet, bien qu'imitant les effets de drogues illicites connues (amphétamines, cocaïne…), un certain nombre de drogues de synthèse ne sont pas classées comme stupéfiants et échappent donc à la législation française. Nombre de ces substances sont vendues sur des sites internet sous des conditionnements aux noms attractifs mais peu explicites. De fait, l'absence d'information et la méconnaissance des produits consommés font que ces NPS peuvent constituer de véritables problèmes de santé publique. Nous rapportons un cas d'allongement du QTc inaugural et consécutif à la prise d'un mélange de deux NPS : la 3-fluoro-phenmetrazine (3-FPM) et la 4-methoxyphencyclidine-hydrochloride (4-MeO-PCP). Cas clinique Un homme de 60 ans se présente spontanément aux urgences. Il est agité et avoue une prise récente de toxique : il explique avoir consommé une poudre blanche dénommée « Wonka » achetée sur l'Internet pour « essayer autre chose ». Ses antécédents principaux sont une polytoxicomanie ancienne (héroïne, amphétamines), des troubles de l'humeur compliqués de nombreuses tentatives de suicide médicamenteux dont la dernière a eu lieu en 2013, une hépatite C chronique diagnostiquée en 1980, une artériopathie oblitérante bilatérale des membres inférieurs avec pose de stent au niveau de l'artère fémorale gauche en 2011. Son traitement quotidien comporte : Plavix (75 mg), Prazépam (10 mg), Gabapentine (300 mg), Duloxétine (60 mg) et Buprenorphine (10 mg). A son arrivée aux urgences, le patient présentait une agitation avec désinhibition ainsi qu'un myosis bilatéral. Un épisode hypotensif bien toléré à 101/ 54 mm Hg, sans signe d'hypo-perfusion périphérique s'ajoutait au tableau clinique initial. La fréquence cardiaque était à 54 battements/minute (bpm), la température cutanée à 37,3°C. L'IMC du patient était à 24 kg/m². Le bilan biologique réalisé à l'arrivée du patient dans le service des urgences retrouvait une glycémie à 0,90 g/L, un ionogramme sanguin normal, une absence de troubles hydro électriques, des CPK augmentés à 1896 U/L. Le bilan hépatique était normal. La fonction rénale était conservée avec une créatininémie à 67 µmol/L associée à un débit de filtration glomérulaire à 99 mL/min selon CKD-EPI. La troponine réalisée était augmentée à 287 ng/L, puis à 343 ng/L 4 heures plus tard. L'éthanolémie était nulle et la recherche de paracétamol était négative. L'électrocardiogramme (ECG) réalisé dans le service des urgences retrouvait des intervalles QTc allongés à 543 ms, des QRS fins normo axés, et un PR à 143 ms (Figure 1). Le patient est orienté vers le service de cardiologie pour exploration de cet allongement du QTc non connu antérieurement. Lors de l'hospitalisation en cardiologie, la pression artérielle était à 137/75 mm/Hg, la fréquence cardiaque à 78 bpm, la saturation en oxygène à 100% en air ambiant. Sur le plan cardiaque, le patient était asymptomatique malgré un QTc allongé à 529 ms à J1. A l'auscultation, les bruits du coeur étaient réguliers sans souffle perçu. Le patient ne présentait pas de signe d'insuffisance cardiaque. Le dosage de la troponine va diminuer dès J1. Sur le plan psychiatrique, il est noté une amélioration de l'agitation à J2. Le patient sort d'hospitalisation à J3. Le QTc est à 462 ms sur l'ECG réalisé à la sortie. La figure 2 présente l'évolution du QTc et de la troponine lors de l'hospitalisation. Le patient sera revu en consultation pour réalisation d'un bilan psychiatrique et cardiologique avec la réalisation d'une scintigraphie myocardique de stress afin de ne pas méconnaitre une cardiopathie ischémique sous jacente. L'ECG et la scintigraphie de stress réalisés un mois après l'hospitalisation seront normaux. Matériel et méthodes Prélèvements Les analyses ont été réalisées dans 3 types d'échantillons : sang, urine et 2 pailles supposées utilisées pour la consommation de « Wonka » récupérées au domicile du patient (1 couleur corail, 1 couleur jaune : figure 3). Le sang et les urines ont été prélevés environ 10 heures après l'arrivée du patient aux urgences. L'ensemble des échantillons a été conservé à 4°C dès réception au laboratoire. Analyses toxicologiques Les analyses qualitatives des pailles, du sang et des urines ainsi que les analyses quantitatives du sang et des urines ont été réalisées par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem (LC-MS/MS) sur un Xevo TQ-S (Waters®, France) après extraction liquide-liquide. La séparation chromatographique a été effectuée sur une colonne analytique Acquity UPLC HSS C18 1,8 µm 2,1 x 150 mm (Waters®, France). Le gradient d'élution était composé d'une phase mobile aqueuse composée de 5 mM de formiate d'ammonium ajustée avec de l'acide formique à pH 3 et d'une phase organique composée d'acétonitrile avec 0,1 % d'acide formique. L'ionisation était réalisée en mode électro spray positif et l'acquisition était réalisée en mode STA et MRM pour l'analyse qualitative et en mode MRM pour l'analyse quantitative. Les spectres obtenus étaient comparés à ceux fournis par la bibliothèque NIST (Waters®, France) ainsi qu'à ceux de notre propre bibliothèque NPS contenant 153 molécules infusées. L'analyse qualitative des pailles a été réalisée après agitation au vortex automatique dans 1 mL de méthanol pendant 5 min dans chaque sens, puis dilution au 1/100 ème dans du méthanol. Pour l'analyse quantitative du 3-FPM et de la 4-Meo PCP dans le sang et l'urine la métamphétamine D5 (LGC standards ® ) et la kétamine D4 (LGC standards ® ) ont été utilisées comme étalons internes. Les gammes d'étalonnages étendues de 50 à 1000 µg/L étaient réalisées à partir de solutions mères méthanoliques de 3-FPM et de 4-Meo PCP (LGC standards ® ) et à partir de sang total vierge fourni par l'EFS. Les transitions utilisées en MRM sont présentées dans le tableau 1. La quantification des benzodiazépines dans le sang et les urines a été réalisée grâce à un kit LGC (Recipe ® ) avec une gamme s'étendant de 12 à 1300 µg/L. Les LOQ étaient respectivement à 10, 12, 12 et 50 µg/L pour la quantification du diazépam, du nordazépam, de l'oxazépam et du témazépam. Les dosages de la buprénorphine et de la norbuprénorphine dans le sang et l'urine ont été réalisés après extraction sur des colonnes SPE Clean Screen ZSDAU020 (CDL®, Marseille, France). La buprénorphine D4 et norbuprénorphine D4 étaient utilisées comme étalons internes. Les gammes d'étalonnages étendues de 0,5 à 500 µg/L ont été réalisées à partir de solutions mères méthanoliques de buprénorphine (LGC standards ® ) et norbuprénorphine (LGC standards ® ) et à partir de sang vierge fourni par l'EFS. Les LOQ étaient à 0,5 ng/mL pour la buprénorphine et la norbuprénorphine. Les échantillons de sang ont été injectés purs et dilués au demi. L'échantillon d'urine a été analysé pur et dilué au 1/25 ème et au 1/50 ème . Le logiciel Masslynx (Waters ® ) a été utilisé pour le contrôle des instruments, l'acquisition des données, l'analyse des données et l'établissement de rapports. Résultats L'analyse qualitative réalisée dans le sang du patient a mis en évidence la présence de 3-FPM et de 4-MeO-PCP, buprénorphine et norbuprénorphine, diazépam, nordazépam, oxazépam, témazépam et 8-hydroxyloxapine. Les concentrations sanguines des benzodiazépines, de buprénorphine et norbuprénorphine sont de l'ordre des concentrations thérapeutiques [3]. L'analyse qualitative des urines retrouvait la présence de 3-FPM et 4-MeO-PCP, buprénorphine et norbuprénorphine, nordazépam, oxazépam, témazépam, loxapine et 8-hydroxyloxapine, amoxapine et 8-hydroxyamoxapine. Les résultats qualitatifs du sang et de l'urine ont été confirmés par le laboratoire de toxicologie du CHRU de Lille après envoi des prélèvements à -20°C. Les résultats des analyses qualitatives réalisées sur les pailles sont présentés dans le tableau 2. L'analyse des deux pailles retrouvées au domicile du patient a permis de confirmer la présence d'un mélange des deux NPS (3-FPM et 4-MeO-PCP) et une prise probable par voie nasale. Des consommations d'autres substances psychoactives ont pu être objectivées. En effet, le screening large réalisé sur la paille corail retrouvait du méthylphenidate et son métabolite, l'acide ritalinique ainsi que de la cocaïne, confirmant l'habitude de consommation de psychostimulants différents. Par ailleurs, ces substances n'étaient pas retrouvées dans les screenings réalisés dans le sang et l'urine du patient. Les résultats quantitatifs réalisés dans le sang et l'urine sont présentés dans le tableau 3. Discussion Au vu de la présentation clinique et de la prise de NPS avouée par le patient, nous avons d'emblée réalisé une recherche netnographique afin de connaitre la composition du « Wonka ». La recherche a été réalisée avec les mots clés « Wonka », « stimulant », « poudre blanche» sur des moteurs de recherche internet et sur des forums. Cette recherche a été infructueuse, nous menant systématiquement au personnage euphorique imaginé par Roald Dahl ainsi qu'à des pâtisseries réalisées avec du cannabis. Les résultats des screenings sanguins, urinaires et des pailles nous ont permis d'identifier en partie la composition du « Wonka ». Il s'agissait d'une poudre blanche, contenant 2 NPS : le 3-FPM et le 4-MeO-PCP. La 3-fluoro-phenmetrazine ou 3-FPM (numéro CAS : 1350768-28-3) fait partie de la classe chimique des phénylmorpholines. Il s'agit de l'analogue fluoré de la phenmetrazine, anciennement utilisée comme agent amincissant (anorexigène) [1]. La 4-methoxy-phencyclidine ou 4-MeO-PCP (numéro CAS : 2201-35-6) est un produit de synthèse associé à la classe chimique des arylcyclohexylamines. La 4-MeO-PCP et son isomère le 3-MEO PCP sont tous deux dérivés de la phencyclidine (PCP), un analogue structurel de la kétamine [2]. La 3-FPM et la 4-MeO-PCP ont été retrouvées dans l'ensemble des prélèvements analysés. Les concentrations sanguines et urinaires du 3-FPM sont élevées en comparaison des concentrations en 4-MeO-PCP. La 3-FPM est un psychostimulant présenté sous forme de poudre cristalline blanche ou de cachets, généralement consommés par voie orale ou nasale. Il s'agit d'un dérivé de la phenmetrazine, anciennement utilisée comme agent amincissant [3]. La 3-FPM est un agent sympathomimétique indirect agissant sur les neurotransmetteurs tels que la sérotonine, la dopamine et la noradrénaline. La 3-FPM a un effet stimulant. Les effets recherchés sont essentiellement une stimulation cognitive et une euphorie [4]. Les durées d'action varient de 3 à 6 heures après une prise par voie nasale et de 4 à 8 heures après une prise per os. Le craving semble important, poussant à de nouvelles consommations rapprochées dans le temps. Elle est majoritairement excrétée sous forme inchangée dans les urines ou sous forme N-oxyde [5]. Nous retrouvons des concentrations sanguines et urinaires importantes en 3-FPM, respectivement 1990 µg/L et 65900 µg/L. Il existe peu de données concernant des cas d'intoxication par la 3-FPM dans la littérature.

La 4 -

 4 MeO-PCP se présente également sous la forme de poudre cristalline blanche, généralement consommée dans un but hallucinogène et dissociatif, la plupart du temps par voie orale ou nasale. Elle agit par antagonisation des récepteurs NMDA et bloque la recapture de la dopamine et de la noradrénaline [9]. Dans le cas présenté, les concentrations sanguines et urinaires en 4-MeO-PCP étaient respectivement de 36,3 µg/mL et 1080 µg/L. Ces concentrations sont plus faibles que celles décrites lors d'intoxications dans la littérature. McIntyre et coll. décrivent des concentrations sanguines périphériques de 8200 µg/L et des concentrations urinaires de 140000 µg/L suite à un décès imputé à la consommation de 4-MeO-PCP associé à la 4hydroxy-N-methyl-N-ethyltryptamine [10]. Les effets indésirables les plus fréquemment décrits après consommation de 4-MeO-PCP sont des hypertensions, des tachycardies et des désorientations. Il existe peu de cas d'intoxications concernant la 4-MeO-PCP [9]. Les cas d'intoxications impliquant la 3-Methoxy-Phencyclidine (3-MeO-PCP) sont plus nombreux, avec des concentrations sanguines de l'ordre de 180 à 350 µg/L dans le sang et 3000 à 6109 µg/L dans les urines [11-13]. Nous présentons ici un cas d'allongement du QTc inaugural, après la consommation d'un mélange de 3-FPM et 4-MeO-PCP associé à la prise du traitement habituel du patient. Le QTc calculé sur l'ECG réalisé à l'admission du patient aux urgences était à 550 ms en utilisant la méthode de la tangente et la formule de Framingham et Bazett. Selon l'American College of cardiology, l'allongement du QTc est notable à partir de 450 ms chez l'homme et 460 ms chez la femme [14]. Ce défaut de repolarisation favorise la survenue de fibrillations ventriculaires et de torsades de pointes ainsi que le phénomène R sur T [15]. Le risque majeur étant le décès par fibrillation ventriculaire, la survenue d'un QTc long impose une surveillance cardiologique étroite ainsi qu'une recherche étiologique afin d'éviter un arrêt cardiaque par fibrillation ventriculaire. Le principal antécédent cardiovasculaire du patient était une artériopathie oblitérante bilatérale des membres inférieurs avec pose de stent au niveau de l'artère fémorale gauche en 2011. Un ECG réalisé en 2008 avant une prise en charge opératoire était normal, sans allongement du QTc. Il n'a pas été relaté de notion d'antécédent familial cardiovasculaire particulier ou d'allongement du QTc familial. Le bilan cardiaque et notamment la scintigraphie et l'ECG réalisés pendant une épreuve d'effort un mois après l'hospitalisation du patient aux urgences étaient normaux, n'identifiant aucune anomalie myocardique. Au vu du contexte clinique, de l'absence d'antécédents particuliers et de la résolution de l'épisode d'allongement du QTc après arrêt de consommation des NPS, le service de cardiologie a conclu à un épisode d'allongement du QTc secondaire à la consommation de psychostimulants.

le 3 -

 3 FPM et la 4-MeO-PCP associés à la prise d'autres molécules ait pu agir, comme l'amphétamine, sur les canaux potassiques hERG, entrainant un allongement de l'intervalle QTc. Conclusion Nous présentons un cas d'allongement du QTc concomitant à la prise d'un mélange de 3-FPM et 4-MeO-PCP. Les concentrations sanguines élevées en 3-FPM ainsi que le mélange de deux psychostimulants sont probablement à l'origine de l'allongement du QTc dans le cas présenté. La méconnaissance des produits utilisés, la variabilité des produits proposés ainsi que leur facilité d'accès font des NPS des produits dangereux aux effets peu connus, d'autant qu'ils se présentent, le plus souvent, sous forme de mélanges. Les mélanges de psychostimulants peuvent induire une telle cardiotoxicité nécessitant une surveillance étroite du patient et un monitoring ECG. Les auteurs déclarent n'avoir aucun conflit d'intérêt en lien avec cet article.

Figure 2 :

 2 Figure 2 : Evolution du QTc et de la troponine lors de l'hospitalisation du patient

Figure 3 :Tableau 2 :

 32 Figure 3 : Paille corail et paille jaune retrouvées au domicile du patient


Alexandr Gish
email: alexandr.gish@chu-lille.fr

Jean-Francois Wiart

Elodie Turpin

Delphine Allorge

Jean-Michel Gaulier

Jean-François Wiart

State-of-the-art and interest of endocannabinoid and endocannabinoid-like substances plasma determinations

Keywords: système endocannabinoïde, pathologie humaine, méthodes de dosages Endocannabinoid system, human pathology, assays

teaching and research institutions in France or abroad, or from public or private research centers.

Introduction

La plante Cannabis sativa, mieux connu sous les noms de marijuana ou cannabis, a été longtemps utilisée en médecine humaine. Les plus anciens documents connus qui rapportent cet usage (en Chine environ il y a 5000 ans) concernent le traitement de la douleur [START_REF] Mechoulam | Cannabinoids As Therapeutic Agents[END_REF]. Le siècle dernier a été celui de la découverte de la substance active principale, le ∆-9tetrahydrocannabinol (∆-9-THC), parmi 70 autres phytocannabinoïdes [START_REF] Pacher | The Endocannabinoid System as an Emerging Target of Pharmacotherapy[END_REF][START_REF]Isolation, Structure, and Partial Synthesis of an Active Constituent of Hashish[END_REF]. Les recherches sur les effets du cannabis sur l'organisme ont permis de découvrir les récepteurs cannabinoïdes (CB1, CB2) et des substances endogènes agonistes de ces récepteurs (endocannabinoïdes) qui constituent un système de régulation dit « système des endocannabinoïdes » (SEC) .

L'exposition au ∆-9-THC est généralement accompagnée de modifications de la fonctionnalité de ce système endocannabinoïde [START_REF] Whitlow | Functional consequences of the repeated administration of Delta9-tetrahydrocannabinol in the rat[END_REF]. Le SEC, ou endocannabinoïdome, est un système endogène complexe puisqu'il est composé par les récepteurs cannabinoïdes [CB1 et CB2, CB3 (GPR55), GRP119, TRPV1 (transient receptor potential vanilloid 1),PPAR α et γ], les ligands de ces récepteurs (ECs) c'est à dire les molécules endocannabinoïdes et les molécules endocannabinoïdes-like, et les enzymes nécessaires à leur synthèse et leur dégradation [START_REF] Marzo | Endocannabinoids as regulators of transient receptor potential (TRP) channels: A further opportunity to develop new endocannabinoid-based therapeutic drugs[END_REF][START_REF] Pistis | From surface to nuclear receptors: the endocannabinoid family extends its assets[END_REF][START_REF] Maccarrone | Intracellular trafficking of anandamide: new concepts for signaling[END_REF].

Depuis l'identification des récepteurs aux cannabinoïdes et de leurs ligands, de nombreuses études ont été menées pour comprendre les fonctions du SEC. Elles ont notamment permis de montrer l'implication du SEC dans les régulations de la balance énergétique au niveau central et périphérique, de la réponse au stress ou encore de la plasticité cérébrale.

L'objectif de ce manuscrit est de réaliser une synthèse bibliographique positionnant l'intérêt du dosage des ligands endogènes du SEC dans ce contexte, et de présenter les méthodes analytiques existantes.

A -Généralités sur le système endocannabinoïde 1 -Principaux endocannabinoides et endocannabinoïdes-like

L'identification et le clonage du récepteur CB1 ont permis la découverte du premier agoniste endogène de ce récepteur, l'arachidonoyléthanolamide (anandamide ou AEA), identifié dans le cerveau porcin en 1992 [START_REF] Devane | Isolation and structure of a brain constituent that binds to the cannabinoid receptor[END_REF]. Cette molécule possède une activité d'agoniste partiel sur les récepteurs CB1 et CB2 [START_REF] Devane | Isolation and structure of a brain constituent that binds to the cannabinoid receptor[END_REF]. Ces observations ont conduit à la découverte du 2arachidonoylglycérol (2-AG), une autre substance importante dans le système endocannabinoïde [START_REF] Sugiura | 2-Arachidonoylglycerol: a possible endogenous cannabinoid receptor ligand in brain[END_REF][START_REF] Mechoulam | Identification of an endogenous 2-monoglyceride, present in canine gut, that binds to cannabinoid receptors[END_REF]. Le 2-AG a démontré une activité d'agoniste complet sur les récepteurs cannabinoïdes. Ces deux endocannabinoïdes sont actuellement les plus étudiés, mais il y a environ 13 autres molécules décrites qui ont des propriétés activatrices ou inhibitrices sur les récepteurs cannabinoïdes [START_REF] Pertwee | Endocannabinoids and Their Pharmacological Actions[END_REF]. Les structures de ces 2 molécules sont représentées dans la figure 1.

Les autres molécules qu'il est nécessaire d'aborder sont des médiateurs endocannabinoïdeslike. Ces médiateurs comportent la classe des N-acyle-amides à longues chaines qui inclue les N-acyle-taurines, N-acyle-sérotonines, N-acyle-dopamines, les amides primaires des acides gras et les N-acyle acides aminés. Chacun de ces médiateurs possède une action sur sa propre cible ainsi que sa propre voie métabolique. Ces voies métaboliques et ces récepteurs sont souvent partagés avec les molécules endocannabinoïdes, ce qui justifie le nom porté par ce complexe de signalisation : endocannabinoïdome [START_REF] Cristino | Cannabinoids and the expanded endocannabinoid system in neurological disorders[END_REF]. Dans la suite de ce manuscrit, nous allons plus particulièrement nous intéresser aux deux molécules endocannabinoïdes-likes suivantes : N-oléoyléthanolamine (OEA) et N-palmitoyléthanolamide (PEA) (figure 2). Ce choix est justifié par le nombre croissant de publications (surtout pour le PEA), en particulier dans le domaine de la recherche clinique. L'OEA a été découverte en 1963 dans l'intestin grêle et dans le tissu adipocytaire de cobayes albinos [START_REF] Bachur | Microsomal synthesis of fatty acid amides[END_REF]. La production d'OEA s'effectue à la demande dans les entérocytes, et elle est stimulée par l'alimentation [START_REF] Astarita | Postprandial increase of oleoylethanolamide mobilization in small intestine of the Burmese python (Python molurus)[END_REF]. Cette substance n'a pas d'activité directe sur les récepteurs cannabinoïdes. En fait, l'OEA a une action agoniste sur les récepteurs PPAR-α permettant l'activation de TRPV1 et une action agoniste sur les récepteurs GPR55 et GPR119 [START_REF] Borrelli | Role of acylethanolamides in the gastrointestinal tract with special reference to food intake and energy balance[END_REF]. Le N-palmitoyléthanolamide a été isolé pour la première fois en 1958 dans le soja, le jaune d'oeuf et la farine d'arachide [START_REF] Ganley | Anti-inflammatory activity on compounds obtained from egg yolk, peanut oil, and soybean lecithin[END_REF]. Les propriétés biologiques principales de cette molécule, comme l'effet anti-inflammatoire et analgésique, sont secondaires à l'activation des récepteurs PPAR-α, CB2, TRPV1 et GPR55 et à l'inhibition de l'hydrolase des amides d'acides gras (FAAH) et la cyclooxygénase 2 (COX-2). Les recherches actuelles sont en particulier dirigées vers les propriétés antalgiques du PEA, avec l'obtention de nouveaux traitements bien toléré comme cible [START_REF] Rankin | The Basal Pharmacology of Palmitoylethanolamide[END_REF].

Métabolisme des endocannabinoïdes

L'AEA comme l'OEA et le PEA sont des molécules appartenant à la classe des Nacyléthanolamines (NAE). L'AEA est produit à la demande à partir de N-acylephosphatidyléthanolamine (NAPE) par NAPE-spécifique phospholipase D [START_REF] Pacher | The Endocannabinoid System as an Emerging Target of Pharmacotherapy[END_REF]. La dégradation se fait par une oxydation et/ou une hydrolyse au niveau intracellulaire. L'AEA est dégradée par la fatty acid amide hydrolase (FAAH) vers l'éthanolamine et l'acide arachidonique [START_REF] Murataeva | Parsing the players: 2-arachidonoylglycerol synthesis and degradation in the CNS[END_REF]. Le 2-AG est produit à partir du diacylglycérol par la DAG lipase (DAGL) alpha ou beta [START_REF] Murataeva | Parsing the players: 2-arachidonoylglycerol synthesis and degradation in the CNS[END_REF].

Après production dans l'espace intracellulaire, l'AEA et le 2-AG diffusent passivement à travers la membrane cellulaire grâce à leurs propriétés hydrophobes. Le 2-AG est majoritairement hydrolysé par la monoacylglycérol lipase (MAGL) vers l'acide arachidonique et le glycérol [START_REF] Kano | Endocannabinoid-mediated control of synaptic transmission[END_REF].

L'OEA et le PEA sont principalement produits à la demande, comme AEA, à partir de la NAPE par la NAPE-spécifique phospholipase D sur la surface des membranes phospholipidiques [START_REF] Hansen | Determination of the phospholipid precursor of anandamide and other N-acylethanolamine phospholipids before and after sodium azide-induced toxicity in cultured neocortical neurons[END_REF][START_REF] Okamoto | Molecular characterization of a phospholipase D generating anandamide and its congeners[END_REF]. L'OEA est métabolisé en éthanolamine et acide oléique par la FAAH ou acylethanolamine-hydrolysing acid amidase (NAAA) [START_REF] Ueda | Purification and characterization of an acid amidase selective for N-palmitoylethanolamine, a putative endogenous anti-inflammatory substance[END_REF][START_REF] Tsuboi | Molecular characterization of N-acylethanolamine-hydrolyzing acid amidase, a novel member of the choloylglycine hydrolase family with structural and functional similarity to acid ceramidase[END_REF]. Le métabolisme du PEA en acide palmitique et éthanolamine s'effectue par la FAAH et la NAAA [START_REF] Ueda | Purification and characterization of an acid amidase selective for N-palmitoylethanolamine, a putative endogenous anti-inflammatory substance[END_REF][START_REF] Cravatt | Molecular characterization of an enzyme that degrades neuromodulatory fatty-acid amides[END_REF].

Récepteurs du système endocannabinoïde

Le récepteur CB1 (cannabinoid receptor 1) est un récepteur couplé avec une protéine Gi (inhibition de la voie de signalisation de l'adénylate cyclase) avec signalisation de l'AMP cyclique et activation de la voie de MAP (mitogen-activated protein) kinase. Le gène codant pour le récepteur CB1 (CNR1) se situe sur le chromosome 6q14-15 [START_REF] Lutz | Molecular biology of cannabinoid receptors[END_REF]. Ce gène code pour une protéine comportant 472 acides aminés. Le CB1 possède des propriétés de modulation des canaux ioniques, inhibant N-et P/R-type des canaux calciques, et stimulant les récepteurs potassiques [START_REF] Ryberg | The orphan receptor GPR55 is a novel cannabinoid receptor[END_REF]. L'activation du CB1 est à l'origine de propriétés anxiolytiques, analgésiques, neuroprotectrices et antiémétique [START_REF] Izzo | Non-psychotropic plant cannabinoids: new therapeutic opportunities from an ancient herb[END_REF][START_REF] Micale | Endocannabinoid system and mood disorders: priming a target for new therapies[END_REF].

Le récepteur CB2 (cannabinoid receptor 2) est codé par le gène CNR2 situé en 1p34-p35 et codant pour une protéine comportant 360 acides aminés. Ce récepteur ne présente que 44% d'homologie de séquence en nucléotides avec CB1 [START_REF] Zhang | Species differences in cannabinoid receptor 2 and receptor responses to cocaine self-administration in mice and rats[END_REF]. Chez l'homme, il a été identifié 2 isoformes de CB2R [START_REF] Liu | Species differences in cannabinoid receptor 2 (CNR2 gene): identification of novel human and rodent CB2 isoforms, differential tissue expression and regulation by cannabinoid receptor ligands[END_REF]. La distribution du récepteur CB2 est principalement associée au système immunitaire [START_REF] Klein | Cannabinoids and the immune system[END_REF]. Le CB2 régule la libération des cytokines et la migration des cellules immunitaires [START_REF] Yang | Latest advances in novel cannabinoid CB(2) ligands for drug abuse and their therapeutic potential[END_REF].

Le récepteur GPR55 (CB3) est composé de 319 acides aminés avec le gène qui se situe sur chromosome 2q37 [START_REF] Sawzdargo | Identification and cloning of three novel human G protein-coupled receptor genes GPR52, PsiGPR53 and GPR55: GPR55 is extensively expressed in human brain[END_REF]. Celui-ci possède 14 à 15% d'homologie de séquence avec le CB1 et le CB2 [START_REF] Oka | Identification of GPR55 as a lysophosphatidylinositol receptor[END_REF]. Le récepteur GPR55 ne présente pas de site de liaison classique aux cannabinoïdes [START_REF] Petitet | GPR55 as a new cannabinoid receptor: still a long way to prove it[END_REF], mais l'anandamide et le virodhamine ont une activité d'agoniste partiel sur ce récepteur [START_REF] Sharir | The endocannabinoids anandamide and virodhamine modulate the activity of the candidate cannabinoid receptor GPR55[END_REF]. Le ligand naturel du récepteur GPR55 est le L-α-lysophosphatidylinositol (LPI) [START_REF] Oka | Identification of GPR55 as a lysophosphatidylinositol receptor[END_REF]. Il a été démontré l'implication du récepteur GPR55 dans l'inflammation, les douleurs neuropathiques, certains désordres métaboliques, le développement osseux et les pathologies cancéreuses [START_REF] Lingerfelt | Identification of Crucial Amino Acid Residues Involved in Agonist Signaling at the GPR55 Receptor[END_REF].

Le récepteur GRP119 est composé de 335 acides aminés avec le gène codant qui se situe sur le chromosome Xp26.1 [START_REF] Fredriksson | Seven evolutionarily conserved human rhodopsin G protein-coupled receptors lacking close relatives[END_REF]. Ce récepteur est très répandu dans le pancréas et il est capable d'agir comme récepteur à l'insuline et en réponse à la stimulation par les différents métabolites des lipides exogènes mais aussi endogènes [START_REF] Chu | A role for intestinal endocrine cell-expressed g protein-coupled receptor 119 in glycemic control by enhancing glucagon-like Peptide-1 and glucose-dependent insulinotropic Peptide release[END_REF]. L'OEA et le 2-monoacylglycérol possèdent une activité agoniste sur ce récepteur [START_REF] Hansen | GPR119 as a fat sensor[END_REF]. Les recherches récentes sur les agonistes et antagonistes exogènes du récepteur GRP119 ont démontré l'utilisation potentielle de ce récepteur comme cible dans le traitement du diabète et de l'obésité [START_REF] Chen | Discovery of 5-methyl-2-(4-((4-(methylsulfonyl)benzyl)oxy)phenyl)-4-(piperazin-1-yl)pyrimidine derivatives as novel GRP119 agonists for the treatment of diabetes and obesity[END_REF].

La sous-famille des récepteurs TRPV (transient receptor potential vanilloid) est composée de 6 récepteurs et elle est organisée en 4 groupes : TRPV1/TRPV2, TRPV3, TRPV4, et TRPV5/TRPV6 [START_REF] Du | The Role of Transient Receptor Potential Vanilloid 1 in Common Diseases of the Digestive Tract and the Cardiovascular and Respiratory System[END_REF]. TRPV1, TRPV2, TRPV3 et TRPV4 sont modérément perméables pour les ions calcium (Ca2+) et les récepteurs TRPV5 et TRPV6 sont très sélectifs pour les ions calcium (Ca2+) [START_REF] Nilius | The transient receptor potential family of ion channels[END_REF]. Le récepteur TRPV1, aussi connu comme le récepteur à la capsaïcine, a été le premier récepteur découvert et cloné de la sous famille des récepteurs TRPV1 [START_REF] Caterina | The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway[END_REF]. TRPV1, composé de 828 acides aminés, est codé par un gène se situant sur le chromosome X.

Ce récepteur possède une structure quaternaire avec 6 domaines transmembranaires [START_REF] Vy | Structure of TRPV1 channel revealed by electron cryomicroscopy[END_REF].

L'activation de TRPV1 permet un influx extracellulaire de Ca2+. Cette activation est impliquée dans plusieurs mécanismes physiologiques comme la libération des neurotransmetteurs, l'excitabilité membranaire et la contraction musculaire [START_REF] Jordt | TRP channels in disease[END_REF]. La similarité structurale entre la capsaïcine et l'AEA a permis de déterminer l'activité activatrice de l'AEA sur ce récepteur [START_REF] Ross | Anandamide and vanilloid TRPV1 receptors[END_REF].

Les récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (PPAR) appartiennent à la grande famille des récepteurs nucléaires d'hormones qui est composée des récepteurs PPAR-α, PPARβ/δ et PPAR-γ. Les récepteurs PPAR impliqués dans le système endocannabinoïde sont PPARα et PPAR-β, qui sont codés par les gènes NR1C1 (chromosome 22) et NUC1/NR1C2 (chromosome 6), respectivement [START_REF] Wójtowicz | The Novel Role of PPAR Alpha in the Brain: Promising Target in Therapy of Alzheimer's Disease and Other Neurodegenerative Disorders[END_REF]. Ces récepteurs sont impliqués dans la régulation de la transcription protéique, du métabolisme lipidique et de la thermogénèse [START_REF] Wójtowicz | The Novel Role of PPAR Alpha in the Brain: Promising Target in Therapy of Alzheimer's Disease and Other Neurodegenerative Disorders[END_REF]. L'AEA en se fixant sur les récepteurs PPAR affecte de façon significative la transcription [START_REF] Bouaboula | Anandamide induced PPARgamma transcriptional activation and 3T3-L1 preadipocyte differentiation[END_REF].

Distribution et rôles des récepteurs endocannabinoïdes

Système nerveux central (SNC) et périphérique (SNP)

La microscopie électronique et la microscopie de haute résolution ont permis de faire des progrès majeurs dans la définition de la structure de répartition des récepteurs cannabinoïdes au niveau de système nerveux central et de ses implications dans la régulation de l'homéostasie.

La localisation majoritaire du récepteur CB1 au niveau du SNC se situe au niveau présynaptique des neurones excitateurs et inhibiteurs [START_REF] Hu | Distribution of the Endocannabinoid System in the Central Nervous System[END_REF]. L'autre point important est la présence de la DAGL (enzyme impliquée dans la biosynthèse de 2-AG) au niveau de la membrane post-synaptique et de la MAGL (enzyme responsable de la dégradation de 2-AG) au niveau des terminaisons axonales. Cette découverte a permis de mettre en évidence un système d'inhibition antérograde de la biosynthèse des endocannabinoïdes, particulièrement pour le 2-AG [START_REF] Wilson | Endogenous cannabinoids mediate retrograde signalling at hippocampal synapses[END_REF] et de définir l'application des endocannabinoïdes dans les processus d'excitation et d'inhibition de la neurotransmission, de la potentialisation et de la dépolarisation neuronale [START_REF] Araque | Synaptic functions of endocannabinoid signaling in health and disease[END_REF]. De récentes études ont souligné le rôle important du SEC dans la plasticité cérébrale au court et au long terme. Tout d'abord, le SEC, et plus particulièrement les CB1, sont impliqués dans la neurogénèse et dans la régulation du Brain-derived neurotrophic factor (BDNF). Ce facteur de croissance facilite la survie et le fonctionnement des neurones [START_REF] Vicario-Abejón | Role of neurotrophins in central synapse formation and stabilization[END_REF]. En effet, des souris CB1 -/- montrent des niveaux de BDNF dans l'hippocampe significativement plus bas que celui de souris sauvages en condition de repos et en réponse à un stress [START_REF] Aso | BDNF impairment in the hippocampus is related to enhanced despair behavior in CB1 knockout mice[END_REF]. De plus, une activation chronique des CB1 peut induire une augmentation du contenu en BDNF dans certaines zones du cerveau [START_REF] Butovsky | In vivo upregulation of brain-derived neurotrophic factor in specific brain areas by chronic exposure to Delta-tetrahydrocannabinol[END_REF]. De plus, les cellules progénitrices neurales expriment abondamment le CB1R capable de favoriser in vitro la différenciation et la maturation neuronale des cellules astrocytaires par une inhibition de voie signalisation impliquant Extracellular signal-regulated kinases ½ (ERK1/2) [START_REF] Compagnucci | Type-1 (CB1) cannabinoid receptor promotes neuronal differentiation and maturation of neural stem cells[END_REF]. En conséquence de cela, il a été montré que qu'une concentration importante d'AEA dans le SNC est corrélée avec une augmentation de l'activité des CB1R dans l'hippocampe, permettant une neurogenèse hippocampique [START_REF] Jiang | Cannabinoids promote embryonic and adult hippocampus neurogenesis and produce anxiolytic-and antidepressant-like effects[END_REF][START_REF] Hill | Endogenous cannabinoid signaling is required for voluntary exercise-induced enhancement of progenitor cell proliferation in the hippocampus[END_REF].

Une forte expression du CB1R est observée dans le bulbe olfactif, l'hippocampe, les noyaux gris centraux et le cervelet. Une expression modérée de CB1R est observée dans le cortex cérébral, le septum, l'amygdale et l'hypothalamus. Une faible expression est observée au niveau de la corne ventrale de la moelle épinière [START_REF] Mackie | Distribution of cannabinoid receptors in the central and peripheral nervous system[END_REF]. Au niveau du système nerveux périphérique, le CB1R est exprimé au niveau des terminaisons nerveuses sympathiques [START_REF] Tam | The cannabinoid CB1 receptor regulates bone formation by modulating adrenergic signaling[END_REF]. Le CB1R est observé dans le ganglion du nerf trijumeau, les ganglions dorsaux et les terminaisons des nerfs cutanés (régulation de la nociception à partir des nerfs afférents) [START_REF] Clapper | Anandamide suppresses pain initiation through a peripheral endocannabinoid mechanism[END_REF].

De nombreuses études sont en faveur d'un rôle majeur des CB2R dans la régulation immune du SNC avec une expression de ce récepteur sur les cellules microgliales. Comme le récepteur CB1, le récepteur CB2 est impliqué dans la neurogénèse et la formation de la barrière hématoencéphalique [START_REF] Palazuelos | CB2 cannabinoid receptors promote neural progenitor cell proliferation via mTORC1 signaling[END_REF][START_REF] Chung | CB2 receptor activation prevents glial-derived neurotoxic mediator production, BBB leakage and peripheral immune cell infiltration and rescues dopamine neurons in the MPTP model of Parkinson's disease[END_REF].

L'implication des autres récepteurs de l'endocannabinoïdome au niveau du SNC a également été étudiée. Il a été démontré l'implication de TRPV1 dans la plasticité synaptique à court et long terme, avec une implication au niveau de la mémoire, de l'humeur, de la peur, de l'alimentation et du développement visuel et de la locomotion [START_REF] Edwards | TRPV1 in the central nervous system: synaptic plasticity, function, and pharmacological implications[END_REF]. L'activation des récepteurs PPAR-α et PPAR-γ (présents sur les astrocytes, les cellules microgliales et les neurones) produit une activité anti-inflammatoire et neuroprotectrice [START_REF] Villapol | Roles of Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Gamma on Brain and Peripheral Inflammation[END_REF].

L'AEA, par potentialisation des effets de la sérotonine sur les récepteurs 5-HT1a à 89% et inhibition des récepteurs 5HT2a à 36%, aurait une action pharmacologique dans le traitement des migraines aiguës et chroniques [START_REF] Boger | Structural requirements for 5-HT2A and 5-HT1A serotonin receptor potentiation by the biologically active lipid oleamide[END_REF].

L'autre molécule qui joue un rôle important dans la neuroprotection et la promotion de la consolidation de mémoire est l'OEA via le PPAR-α [START_REF] Campolongo | Fat-induced satiety factor oleoylethanolamide enhances memory consolidation[END_REF].

Après une première démonstration des propriétés anxiolytique des phytocannabinoïdes en 1981 par Fabre et McLendon [START_REF] Fabre | The efficacy and safety of nabilone (a synthetic cannabinoid) in the treatment of anxiety[END_REF], de nombreuses études ont été menées pour étudier l'impact du système endocannabinoïde dans les maladies psychiatriques. Néanmoins, les connaissances de son mécanisme exact dans le processus pathologique demeurent mal connues [START_REF] Navarrete | Endocannabinoid System Components as Potential Biomarkers in Psychiatry[END_REF]. Une diminution du taux d'AEA a été observée chez des patients souffrant de maladies psychiatriques liées au stress, incluant une dépression majeure et un syndrome post-traumatique [START_REF] Neumeister | Elevated brain cannabinoid CB1 receptor availability in post-traumatic stress disorder: a positron emission tomography study[END_REF]. Chez des souris avec une déplétion génétique en DAGL et une réduction de la signalisation, une augmentation de l'anxiété a été observée [START_REF] Jenniches | Anxiety, Stress, and Fear Response in Mice With Reduced Endocannabinoid Levels[END_REF]. Une augmentation du taux d'AEA et de PEA a été observée chez des patients souffrant de schizophrénie dans les cellules du liquide cérébrospinal [START_REF] Leweke | Elevated endogenous cannabinoids in schizophrenia[END_REF]. Ce résultat est corrélé avec la concentration sanguine d'AEA qui est significativement augmentée (2,71 +/-0,17 µg/L contre 0,9 +/-0,1 µg/L dans la groupe témoin, p-value 4,5 * 10 -8 ) dans la schizophrénie aiguë avec une normalisation pendant la rémission (1,35 +/-0,25 µg/L contre 0,9 +/-0,1 µg/L dans la groupe témoin, p-value 0,16) [START_REF] De Marchi | Endocannabinoid signalling in the blood of patients with schizophrenia[END_REF].

Néanmoins, une autre étude ne présente pas les mêmes résultats d'augmentation du taux d'AEA (1,1 +/-0,2 µg/L contre 1,1 +/-0,4 µg/L dans la groupe témoin), et cette même étude ne démontre également pas d'augmentation de l'OEA (1,6 +/-0,7 µg/L contre 1,3 +/-0,4 µg/L dans la groupe témoin) [START_REF] Desfossés | Plasma Endocannabinoid Alterations in Individuals with Substance Use Disorder are Dependent on the "Mirror Effect" of Schizophrenia[END_REF].

L'autre aspect important à aborder dans le domaine de la psychiatrie est l'exposition aux substances exogènes psychoactives et les troubles d'addictifs. Etant donné que la production des endocannabinoïdes se fait à la demande, et est associée à une tonalité de signalisation modeste, l'hypothèse émise est que l'exposition aux xénobiotiques psychoactifs peut être associée à une augmentation de la production des molécules endocannabinoïdes [START_REF] De Marchi | Endocannabinoid signalling in the blood of patients with schizophrenia[END_REF]. Les données de la littérature montrent une augmentation d'AEA et de 2-AG dans les cultures cellulaires neuronales hippocampiques exposées à 2 g/L d'alcool [START_REF] Basavarajappa | Acute ethanol suppresses glutamatergic neurotransmission through endocannabinoids in hippocampal neurons[END_REF]. Ces données ont été confirmées par une autre publication avec des cellules neuronales de noyau accumbens [START_REF] Perra | Involvement of the endogenous cannabinoid system in the effects of alcohol in the mesolimbic reward circuit: electrophysiological evidence in vivo[END_REF].

Cette stimulation du SEC par l'éthanol semble dépendre de la zone du cerveau et agir en tant qu'inhibiteur lors d'une exposition aiguë à l'éthanol [START_REF] Basavarajappa | Endocannabinoid System and Alcohol Abuse Disorders[END_REF]. De la même manière qu'avec l'alcool, les injections répétées de nicotine chez des rats sont associées à une augmentation du taux d'AEA dans la zone limbique et dans le tissu du striatum, mais avec une diminution des taux d'AEA et de 2-AG dans le tissu cortical [START_REF] González | Changes in endocannabinoid contents in the brain of rats chronically exposed to nicotine, ethanol or cocaine[END_REF]. L'exposition des rats aux opiacés montre une augmentation d'AEA et une diminution 2-AG dans le striatum, la zone limbique et l'hippocampe [START_REF] Basavarajappa | Endocannabinoid System and Alcohol Abuse Disorders[END_REF]. Enfin, l'exposition de rats à la cocaïne provoque une diminution de la concentration de 2-AG au niveau du cortex frontal et du tissu hippocampique [START_REF] Bystrowska | Changes in endocannabinoid and Nacylethanolamine levels in rat brain structures following cocaine self-administration and extinction training[END_REF][START_REF] Rivera | Cocaine self-administration differentially modulates the expression of endogenous cannabinoid system-related proteins in the hippocampus of Lewis vs. Fischer 344 rats[END_REF][START_REF] Palomino | Effects of acute versus repeated cocaine exposure on the expression of endocannabinoid signaling-related proteins in the mouse cerebellum[END_REF]. [START_REF] Marchioni | Recent advances in LC-MS/MS methods to determine endocannabinoids in biological samples: Application in neurodegenerative diseases[END_REF]. L'hypothèse émise est que cette augmentation est indirectement liée aux symptômes de la pathologie [START_REF] Cristino | Cannabinoids and the expanded endocannabinoid system in neurological disorders[END_REF]. Néanmoins avec les études menées dans un modèle murin de maladie de Parkinson (traité par 6-OHdopamine), l'utilisation des inhibiteurs de MAGL et de FAAH a démontré un effet bénéfique via la stimulation du récepteur CB2 avec un effet neuroprotecteur des inhibiteurs de MAGL [START_REF] Fernández-Suárez | Monoacylglycerol lipase inhibitor JZL184 is neuroprotective and alters glial cell phenotype in the chronic MPTP mouse model[END_REF] et via la stimulation du CB1 et/ou CB2 sur la motricité par les inhibiteurs de FAAH [START_REF] Celorrio | Fatty acid amide hydrolase inhibition for the symptomatic relief of Parkinson's disease[END_REF].

Un autre effet bénéfique de l'inhibition de la FAAH, notamment sur la neuro-inflammation et la neurotoxicité, a été mis en évidence par une augmentation du PEA, un endocannabinoïdelike, qui exerce son action par une activation de PPARα. L'autre agoniste direct du PPARα, l'OEA, possède des effets antidyskinésiques par l'activation du TRPV1 [START_REF] González-Aparicio | Oleoylethanolamide reduces L-DOPA-induced dyskinesia via TRPV1 receptor in a mouse model of Parkinson´s disease[END_REF][START_REF] Esposito | Neuroprotective activities of palmitoylethanolamide in an animal model of Parkinson's disease[END_REF]. Des études cliniques dans la maladie de Parkinson ont été menées avec l'utilisation de CBD, de THC, de nabilone (analogue synthétique du THC) et de PEA, et elles montrent des effets bénéfiques sur la pathologie [START_REF] Cristino | Cannabinoids and the expanded endocannabinoid system in neurological disorders[END_REF].

Dans la pathologie d'Alzheimer (MA), les modifications du système endocannabinoïde sont directement liées à la progression de la maladie. Dans une étude post-mortem de patients atteints d'Alzheimer, la concentration en anandamide est diminuée dans le cortex frontal et temporal, en corrélation inverse avec l'accumulation de peptide bêta-amyloïde [START_REF] Jung | An amyloid β42dependent deficit in anandamide mobilization is associated with cognitive dysfunction in Alzheimer's disease[END_REF]. Cette observation est corrélée avec une augmentation de l'expression et de l'activité de FAAH dans les astrocytes et les cellules microgliales [START_REF] Benito | Cannabinoid CB2 receptors and fatty acid amide hydrolase are selectively overexpressed in neuritic plaqueassociated glia in Alzheimer's disease brains[END_REF]. La stimulation des CB2R diminue l'effet pro inflammatoire des cytokines libérées à partir des microglies dans la maladie d'Alzheimer [START_REF] Cassano | Cannabinoid Receptor 2 Signaling in Neurodegenerative Disorders: From Pathogenesis to a Promising Therapeutic Target[END_REF].

L'autre observation intéressante est une augmentation par le 2-AG de la signalisation au niveau hippocampique avec une augmentation de l'expression de la DAGL [START_REF] Mulder | Molecular reorganization of endocannabinoid signalling in Alzheimer's disease[END_REF]. Ce changement est corrélé à une augmentation plasmatique de 2-AG (Groupe patient atteints de MA : 5,3 µg/L avec un écart-type +/-4,8 µg/L ; groupe contrôle : 3,1 µg/L avec un écart-type 2,5 µg/L ; pvalue 0,02) [START_REF] Altamura | Elevation of Plasma 2-Arachidonoylglycerol Levels in Alzheimer's Disease Patients as a Potential Protective Mechanism against Neurodegenerative Decline[END_REF]. Les conséquences de l'élévation du 2-AG au niveau cérébral ont été également évaluées dans un modèle murin atteint de la MA (FAD-mice) en présence d'inhibiteur de MAGL. Ces modifications sont en lien avec des propriétés anti-inflammatoires et une diminution de la neurodégénérescence [START_REF] Chen | Monoacylglycerol lipase is a therapeutic target for Alzheimer's disease[END_REF]. De la même manière que dans la maladie d'Alzheimer, dans la maladie de Parkinson, l'inhibition de la FAAH provoque une augmentation de PEA qui possède des propriétés anti-inflammatoires via l'activation de PPARα [START_REF] Agostino | Palmitoylethanolamide protects against the amyloid-β25-35-induced learning and memory impairment in mice, an experimental model of Alzheimer disease[END_REF].

Dans la maladie de Huntington (MH), une pathologie héréditaire, associée à la destruction des neurones dopaminergiques dans le globus pallidus et conduisant à une déficience locomotrice et mentale, les concentrations lymphocytaires en AEA chez un patient atteint de MH sont 6 fois supérieures à celles dans une population lymphocytaire d'un groupe sain (38,2 +/-12,5 µg/g de protéine contre 6,3 +/-1,4 µg/g de protéine, p-value : 0,0006). Cette modification peut être expliquée par une diminution de l'activité de la FAAH dans cette pathologie [START_REF] Battista | Severe deficiency of the fatty acid amide hydrolase (FAAH) activity segregates with the Huntington's disease mutation in peripheral lymphocytes[END_REF].

Dans la sclérose en plaque, une pathologie inflammatoire chronique du système nerveux central caractérisée par une réponse auto-immune envers la myéline, certaines études démontrent une activité bénéfique de l'activation des récepteurs CB1 et CB2 [START_REF] Cristino | Cannabinoids and the expanded endocannabinoid system in neurological disorders[END_REF]. Jean-Gilles L. et al. se sont intéressés à l'impact de cette pathologie sur les concentrations plasmatiques des endocannabinoïdes et endocannabinoïdes-like. Ces auteurs ont démontré une augmentation significative de l'AEA dans les trois groupes de patients (« rémittente -progressive », « progressive secondaire » et « progressive primaire »), du PEA dans les groupes « rémittente -progressive » et « progressive secondaire » et de l'OEA dans le groupe « progressive secondaire » [START_REF] Jean-Gilles | Plasma endocannabinoid levels in multiple sclerosis[END_REF]. Ces données d'augmentation des ligands de l'endocannabinoïdome suggèrent une réponse adaptative de l'organisme envers la pathologie [START_REF] Cristino | Cannabinoids and the expanded endocannabinoid system in neurological disorders[END_REF].

Les perturbations des concentrations des endocannabinoïdes ont été démontrées dans de nombreuses autres pathologies neurologiques telles que la sclérose latérale amyotrophique, les lésions cérébrales traumatiques, les accidents vasculaires cérébraux, les crises épileptiques et l'épilepsie [START_REF] Cristino | Cannabinoids and the expanded endocannabinoid system in neurological disorders[END_REF]. Dans la majorité de ces pathologies, les études des variations des ligands du système endocannabinoïde ont été étudiées dans des modèles murins [START_REF] Cristino | Cannabinoids and the expanded endocannabinoid system in neurological disorders[END_REF].

Système gastro-intestinal

L'endocannabinoïdome joue un rôle au niveau de tube digestif dans la modulation de la mobilité gastro-intestinale, la sécrétion de l'acide gastrique, les hormones, les neurotransmetteurs, la perméabilité de l'épithélium intestinal, et dans l'expression des microbiotes. À partir de l'hypothalamus, il permet une régulation de l'appétit et de la balance énergétique. L'action des ECS est largement médiée par l'action sur CB1R [START_REF] Izzo | Non-psychotropic plant cannabinoids: new therapeutic opportunities from an ancient herb[END_REF]. Il y a une régulation par l'AEA, le 2AG et l'OEA, de la prise alimentaire et de la sensibilité pour les lipides [START_REF] Piomelli | A fatty gut feeling[END_REF]. L'OEA régule en particulier l'absorption des acides gras par une activation de deux voies homéostatiques vagales des nerfs afférents [START_REF] Schwartz | The lipid messenger OEA links dietary fat intake to satiety[END_REF] et l'activation de CB2R normalise la motilité gastrique. Les ECs sont importants dans le système anti-inflammatoire permettant la réduction de la toxicité gastrique et de l'inflammation intestinale en conduisant à un blocage du développement des colites [START_REF] Fichna | Cannabinoids alleviate experimentally induced intestinal inflammation by acting at central and peripheral receptors[END_REF].

L'AEA joue un rôle dans la physiopathologie du syndrome du côlon irritable, dans lequel il a été démontré une augmentation du nombre des récepteurs TRPV1 au niveau du colon. Une hypothèse d'application du cannabidiol (CBD) dans la prise en charge des colites repose sur une augmentation du niveau d'AEA par le CBD, ce qui permettrait une désensibilisation de TRPV1 avec une diminution des symptômes. [START_REF] Bisogno | Molecular targets for cannabidiol and its synthetic analogues: effect on vanilloid VR1 receptors and on the cellular uptake and enzymatic hydrolysis of anandamide[END_REF][START_REF] Leweke | Cannabidiol enhances anandamide signaling and alleviates psychotic symptoms of schizophrenia[END_REF].

Système hépatique

La production des endocannabinoïdes, notamment de l'AEA et du 2-AG, au niveau hépatique est assurée par les hépatocytes et les cellules endothéliales [START_REF] Teixeira-Clerc | CB1 cannabinoid receptor antagonism: a new strategy for the treatment of liver fibrosis[END_REF]. Des études récentes ont démontré des liens entre le système endocannabinoïde, le métabolisme hépatique, la stéatose hépatique et la cirrhose [START_REF] Teixeira-Clerc | CB1 cannabinoid receptor antagonism: a new strategy for the treatment of liver fibrosis[END_REF]. Dans ces études, il a été mis en évidence une augmentation de la concentration plasmatique d'AEA et de 2-AG chez des patients avec une stéatose hépatique non alcoolique, quel que soit leur IMC. Ce processus semble être associée à plusieurs fonctions hépatiques [START_REF] Zelber-Sagi | Serum levels of endocannabinoids are independently associated with nonalcoholic fatty liver disease[END_REF]. Au stade de cirrhose, l'AEA périphérique reste augmenté avec une augmentation de l'OEA et du PEA. Le taux de 2-AG reste lui inchangé [START_REF] Caraceni | Circulating and hepatic endocannabinoids and endocannabinoid-related molecules in patients with cirrhosis[END_REF]. L'élévation des endocannabinoïdes et endocannabinoïdes-like s'effectue en réponse à l'évènement pathologique. Il a été démontré que l'AEA possède une activité anti-fibrogénique avec une inhibition de la prolifération des cellules conjonctives [START_REF] Siegmund | Anandamide induces necrosis in primary hepatic stellate cells[END_REF]. Et parallèlement, les propriétés anti-inflammatoires de PEA sont associées à l'activation du récepteur PPARα avec une inhibition de la réponse immunitaire [START_REF] Ross | Anandamide and vanilloid TRPV1 receptors[END_REF].

Système musculaire

Dans le tissu musculaire, l'activation des récepteurs cannabinoïdes provoque une diminution de la sensibilité à l'insuline [START_REF] Lindborg | Effects of in vitro antagonism of endocannabinoid-1 receptors on the glucose transport system in normal and insulinresistant rat skeletal muscle[END_REF] et l'entrée du glucose dans la cellule [START_REF] Esposito | The cannabinoid CB1 receptor antagonist rimonabant stimulates 2-deoxyglucose uptake in skeletal muscle cells by regulating the expression of phosphatidylinositol-3-kinase[END_REF]. La stimulation des CB1R dans le tissu adipeux induit la lipogenèse [START_REF] Vettor | The role of the endocannabinoid system in lipogenesis and fatty acid metabolism[END_REF]. De nombreuses recherches s'intéressent actuellement à l'association entre l'endocannbinoïdome et l'exercice physique.

Celles-ci ont mis en évidence l'augmentation des concentrations d'AEA suite à un exercice physique [START_REF] Sparling | Exercise activates the endocannabinoid system[END_REF]. Koltyn

B -Méthodes de dosage plasmatique des substances endocannabinoïdes et endocannabinoïdes-like 1. Généralités concernant plasmatique des ECS (AEA, 2-AG, OEA et PEA)

La mise au point d'une méthode de dosage plasmatique de molécules telles que les endocannabinoïdes est particulièrement complexe en raison des propriétés de ces substances :

• des concentrations sanguines physiologiques très faibles nécessitant une sensibilité de détection performante. Les concentrations sanguines usuelles compilées à partir de 15 études différentes vont de 0,2 à 5,0 µg/L pour AEA, de 1,2 à 53 µg/L pour OEA, de 1,4 à 125 µg/L pour PEA et de 0,6 à 15 µg/L pour 2-AG [START_REF] Angelini | Identification of a Widespread Palmitoylethanolamide Contamination in Standard Laboratory Glassware[END_REF].

• une faible stabilité de ces molécules à la température ambiante, et surtout une isomérisation spontanée du 2-AG vers le 1-AG provoquée et influencée par les différents solvants organiques utilisés dans les méthodes d'extraction en phase liquide, la présence de sérum albumine dans l'échantillon, des hautes valeurs de pH et la température élevée dans la préparation pré analytique des échantillons [START_REF] Zoerner | Simultaneous UPLC-MS/MS quantification of the endocannabinoids 2-arachidonoyl glycerol (2AG), 1-arachidonoyl glycerol (1AG), and anandamide in human plasma: minimization of matrix-effects, 2AG/1AG isomerization and degradation by toluene solvent extraction[END_REF][START_REF] Rouzer | Chemical stability of 2-arachidonylglycerol under biological conditions[END_REF].

• La séparation des isomères de l'OEA (VEA, EEA, tVEA, PeEA, t-PeEA) [START_REF] Röhrig | Identification of the oleic acid ethanolamide (OEA) isomer cis-vaccenic acid ethanolamide (VEA) as a highly abundant 18:1 fatty acid ethanolamide in blood plasma from rats and humans[END_REF][START_REF] Röhrig | Quantification of 24 circulating endocannabinoids, endocannabinoid-related compounds, and their phospholipid precursors in human plasma by UHPLC-MS/MS[END_REF].

• La séparation de l'isomère de l'AEA, l'O-AEA qui est une autre molécule endocannabinoïdes [START_REF] Porter | Characterization of a novel endocannabinoid, virodhamine, with antagonist activity at the CB1 receptor[END_REF].

L'ensemble de ces difficultés implique la nécessité d'une étape de purification pré-analytique poussée permettant d'améliorer la sensibilité et de minimiser l'effet de matrice [START_REF] Trufelli | An overview of matrix effects in liquid chromatography-mass spectrometry[END_REF].

Le Tableau 1 présente l'ensemble des méthodes répertoriées dans la littérature sur la période de 2010 à 2020. Précédemment, une telle revue de la littérature a été réalisée par l'équipe de Zoerner et al. avec une synthèse bibliographique de 1998 à 2010 [START_REF] Zoerner | Quantification of endocannabinoids in biological systems by chromatography and mass spectrometry: a comprehensive review from an analytical and biological perspective[END_REF] et par l'équipe de Marchioni et al. de l'année 2010 à 2017 [START_REF] Marchioni | Recent advances in LC-MS/MS methods to determine endocannabinoids in biological samples: Application in neurodegenerative diseases[END_REF].

Techniques chromatographiques

A l'heure actuelle, les méthodes les plus courantes de dosage des endocannabinoïdes sont basées sur la technique de chromatographie liquide avec détection par spectrométrie de masse en tandem (CL-SM/SM). Mais différentes approches techniques (certaines plutôt historiques et

Chromatographie liquide avec détection UV par barrette de diodes (CL-UV/BD) et par fluorescence (CL-Fluo)

Compte tenu des propriétés structurales des ECs et de l'absence de structure chromophore et fluorophore, la dérivation chimique est également nécessaire pour leur détection en UV ou par fluorescence. Les deux méthodes décrites dans la littérature permettent (1) le dosage de l'AEA après une dérivation avec le chloride de dansyl absorbant en UV [START_REF] Yagen | Novel and sensitive method for the detection of anandamide by the use of its dansyl derivative[END_REF], et (2) le dosage de l'AEA et du 2-AG en fluorescence après la dérivation avec du 4-(N -chloroformylmethyl -N -methyl ) amino -7 -N,N -dimethylaminosulphonyl -2,1,3 benzoxadiazol [START_REF] Wang | Simultaneous measurement of anandamide and 2-arachidonoylglycerol by polymyxin B-selective adsorption and subsequent high-performance liquid chromatography analysis: increase in endogenous cannabinoids in the sera of patients with endotoxic shock[END_REF].

Chromatographie liquide avec détection par spectrométrie de masse (CL-SM, CL-SM/SM)

La chromatographie liquide (en phase inverse) couplée à la spectrométrie de masse est devenue la technique de référence pour le dosage des endocannabinoïdes en raison de ses grandes sensibilités et spécificités, adaptées aux faibles concentrations de ces molécules et à leurs propriétés physicochimiques. A l'heure actuelle, de nombreuses méthodes chromatographiques en CL-SM/SM sont développées pour les dosages des ECs dans différentes matrices : urine, foie, lait, liquide cérébrospinal, cellules cultivées in vitro, sang total, plasma, sérum, cheveux et tissu cérébral.

Prétraitement des échantillons et étape d'extraction

Différentes méthodes de prétraitement des échantillons sont rapportées dans la littérature [START_REF] Marchioni | Recent advances in LC-MS/MS methods to determine endocannabinoids in biological samples: Application in neurodegenerative diseases[END_REF] :

Précipitation protéique

La méthode de précipitation protéique avec les solvants organiques (notamment l'acétonitrile) des échantillons biologiques. La précipitation protéique est donc une approche non sélective. L'application de cette méthode de traitement pré-analytique dans le domaine de dosage des endocannabinoïdes sont rapportées dans certaines publications [START_REF] Balvers | Liquid chromatographytandem mass spectrometry analysis of free and esterified fatty acid N-acyl ethanolamines in plasma and blood cells[END_REF][START_REF] Kantae | Quantitative profiling of endocannabinoids and related N-acylethanolamines in human CSF using nano LC-MS/MS[END_REF][START_REF] Sergi | Determination of the two major endocannabinoids in human plasma by μ-SPE followed by HPLC-MS/MS[END_REF].

Extraction liquide-liquide (LLE)

La méthode d'extraction liquide-liquide avec les solvants organiques non miscibles à l'eau pour le dosage des endocannabinoïdes est basée sur les propriétés lipophiles de ces molécules. Les différents solvants utilisés sont principalement le chloroforme, le toluène, le mélange de chloroforme et de méthanol et l'acétate d'éthyle/hexane [START_REF] Zoerner | Quantification of endocannabinoids in biological systems by chromatography and mass spectrometry: a comprehensive review from an analytical and biological perspective[END_REF]. L'évaluation de la LLE doit, ici, intégrer la possibilité d'utiliser différents solvants, une évaluation de l'effet de matrice, le pourcentage d'isomérisation du 2-AG vers le 1-AG et la stabilité de 2-AG dans les échantillons plasmatiques. L'effet de matrice a été évalué avec les mesures des concentrations de phospholipides extraits après LLE par des dosages en CL-SM/SM en ionisation négative, selon une liste de phospholipides proposée par Xia et al. [START_REF] Xia | Phospholipids in liquid chromatography/mass spectrometry bioanalysis: comparison of three tandem mass spectrometric techniques for monitoring plasma phospholipids, the effect of mobile phase composition on phospholipids elution and the association of phospholipids with matrix effects[END_REF]. La littérature montre que les pourcentages d'extraction avec le toluène, l'éthyle acétate/isohexane 1:1, l'éthyle acétate, et l'éthyle acétate heptane 1:9 sont de l'ordre de 70 à 80% pour le 2-AG et de 60 à 70 % pour l'AEA [START_REF] Zoerner | Quantification of endocannabinoids in biological systems by chromatography and mass spectrometry: a comprehensive review from an analytical and biological perspective[END_REF]. La LLE avec le toluène et la solution d'acétate d'éthyl/l'isohexane démontre les meilleurs résultats sur l'effet de matrice (avec 2% pour le toluène et 5% pour l'acétate d'éthyle/isohexane 1:1) et, pour le toluène, un plus faible pourcentage d'isomérisation du 2-AG vers le 1-AG [START_REF] Zoerner | Simultaneous UPLC-MS/MS quantification of the endocannabinoids 2-arachidonoyl glycerol (2AG), 1-arachidonoyl glycerol (1AG), and anandamide in human plasma: minimization of matrix-effects, 2AG/1AG isomerization and degradation by toluene solvent extraction[END_REF].

Une des variantes de l'extraction liquide-liquide est une extraction liquide-liquide avec l'utilisation de mélange des sels (Salting-out assisted liquid-liquid extraction : SALLE) (magnésium sulfate, acétate d'ammonium, sulfate de zinc et chlorite de calcium) avec les solvants organiques miscibles dans l'eau (acétonitrile, acétone, acétate d'éthyle et isopropanol).

L'utilisation de ces sels permet et/ou améliore la séparation des phases [START_REF] Tang | Salting-out assisted liquid-liquid extraction for bioanalysis[END_REF]. Selon les données disponibles, ce type d'extraction permet de gagner en rapidité, est moins nocif pour l'environnement et présente un coût de revient plus faible qu'avec les autres méthodes d'extraction par LLE [START_REF] Marchioni | Recent advances in LC-MS/MS methods to determine endocannabinoids in biological samples: Application in neurodegenerative diseases[END_REF].

L'extraction en phase solide (SPE)

A l'heure actuelle, la SPE a démontré une grande sélectivité par rapport à la précipitation protéique ou la LLE. Les SPE avec phase stationnaire inverse sont de plus en plus utilisées à l'heure actuelle. Le principe de la SPE est l'adsorption sur la phase stationnaire (présent dans une cartouche) des molécules à extraire, suivi d'une élution de ces composés d'intérêt.

L'utilisation de phase stationnaire de type C18 permet la séparation des endocannabinoïdes et des molécules interférentes, et donc, de diminuer le bruit de fond ainsi que l'effet de suppression des ions au niveau du spectromètre de masse [START_REF] Gaitán | Endocannabinoid Metabolome Characterization of Transitional and Mature Human Milk[END_REF].

Nouvelles méthodes d'extraction

Les nouvelles techniques de détection développées ont permis de minimiser les étapes de préparation des échantillons biologiques ainsi que le temps nécessaire à l'extraction [START_REF] Mazzola | Liquid-liquid extraction of biomolecules: an overview and update of the main techniques[END_REF].

Utilisation d'une seconde colonne de purification (« column switching » LC-MS/MS)

La méthode de « column switching » en CL-SM/SM pour le dosage des endocannabinoïdes a été décrite par Ji D. et al. avec la mise en place d'une méthode du dosage du NADA et de l'OLDA dans le cerveau de rats [START_REF] Ji | A sensitive and accurate quantitative method to determine Narachidonoyldopamine and N-oleoyldopamine in the mouse striatum using columnswitching LC-MS-MS: use of a surrogate matrix to quantify endogenous compounds[END_REF]. Une autre méthode sur la base de « column-switching » en micro-flow pour le dosage d'AEA, de 2-AG, de 1-AG, de PEA et de LEA a été développée par Kirkwood et al. dans le plasma des ours noirs (avec utilisation de la LLE et de 2 colonnes en « column-switching ») [START_REF] Kirkwood | A novel microflow LC-MS method for the quantitation of endocannabinoids in serum[END_REF].

Micro-SPE

Les méthodes utilisant la µ-SPE consistent en utilisation d'embouts de pipettes avec une phase stationnaire inverse C18 à l'intérieur des embouts. Cette méthode, décrite par M. Sergi et al., est couplée avec une précipitation protéique préalable pour le dosage de l'AEA et du 2-AG. Les molécules d'intérêt sont retenues sur la phase stationnaire de l'embout de pipette, puis sont éluées avec une solution de méthanol contenant 10 mM d'acide formique [START_REF] Sergi | Determination of the two major endocannabinoids in human plasma by μ-SPE followed by HPLC-MS/MS[END_REF]. Les méthodes à la base de la µ-SPE permettent de minimiser le temps de préparation des échantillons par rapport aux méthodes utilisant la SPE conventionnelle [START_REF] Marchioni | Recent advances in LC-MS/MS methods to determine endocannabinoids in biological samples: Application in neurodegenerative diseases[END_REF].

Micro-extraction par liquide magnétique (MLME)

Une innovation des dernières années

Déclaration d'intérêt

Les auteurs déclarent n'avoir aucun conflit d'intérêt en lien avec cet article.

Légendes des figures et tableaux

  Chez l'homme une diminution du taux plasmatique d'AEA et d'OEA a été observée dans le cas le cas de troubles addictifs (cannabis, alcool, cocaïne) par l'équipe de Desfosses : concentration moyenne d'AEA de 0,7 +/-0,2 µg/L (à comparer avec le groupe témoin 1,1 +/-0,4 µg/L ; pvalue à 0,001) et celle d'OEA de 1,0 +/-0,5 µg/L (à comparer avec le groupe témoin 1,6 +/-0,7 µg/L) [74]. De nombreuses études ont été réalisées pour comprendre les variations de système endocannabinoïdes provoquées par les pathologies neurodégénératives. Dans la maladie de Parkinson, il est observé, d'une part une augmentation des concentrations circulantes d'AEA chez des patients non traités, et d'autre part une diminution de ces mêmes concentrations chez des patients recevant un traitement à base de précurseurs de la dopamine et d'agonistes dopaminergiques. Dans une population de patients atteints de Parkinson, l'AEA est situé dans un intervalle de 2,09 à 5,91 µg/L, ce qui parait plus élevé comparé aux valeurs observées dans la population saine (0,70 à 3,13 µg/L) dans le liquide cérébrospinal

4. 4 .

 4 Système immunitaire L'endocannabinoïdome joue un rôle dans la signalisation des cellules immunitaires, en particulier dans la réponse immunitaire adaptative [105]. Le 2-AG en activant le récepteur CB2, inhibe la réponse immunitaire et la migration des cellules immunitaires [106]. L'AEA inhibe la production des cytokines pro-inflammatoires, et provoque une diminution des niveaux d'IL6 et IL8. En activant le récepteur de CB2, l'AEA diminue une libération d'IL-2, de TNF alpha et d'INF gamma, par les lymphocytes T activés périphériques [107].

  et al. ont complété ces résultats et ont constaté une élévation d'autres endocannabinoïdes et endocannabinoïdes-like tels que le PEA, l'OEA [108], le docsahexaenoylethanolamide (DEA) et le 2-oleoylglycerol (2-OG) [112]. Ainsi, la stimulation du système endocannabinoide aurait un effet néfaste lors des adaptations induites par l'exercice physique. La figure 3 présente une synthèse des principales fonctions du système endocannabinoïde dans l'organisme et les variations de concentrations des endocannabinoïdes et des endocannabinoïdes-like observées dans les pathologies neurologiques, psychiatriques et hépatiques.

2 . 1 .

 21 aujourd'hui obsolètes) ont été utilisé dans les dosages des principaux endocannabinoïdes étudiés : 2-AG et AEA. Les techniques retrouvées dans la littérature sont donc [120] : 1. La chromatographie gazeuse couplée avec détection par spectrométrie de masse (CG-SM et CG-SM/SM) 2. La chromatographie liquide avec détection UV par barrette de diodes (CL-UV/BD) 3. La chromatographie liquide avec détection par fluorimétrie (CL-Fluo) 4. La chromatographie liquide avec détection par spectrométrie de masse (CL-SM et CL-SM/SM) Chromatographie gazeuse avec détection par spectrométrie de masse (CG-SM et CG-SM/SM) L'utilisation des techniques de chromatographie gazeuse implique une étape préalable de dérivation permettant l'obtention d'une sensibilité et d'une spécificité suffisantes pour le dosage des endocannabinoïdes [120]. L'étape de dérivation permet en effet d'augmenter la stabilité et la volatilité de ces substances. Néanmoins, Maccarrone et al. rapportent la possibilité d'utilisation de la chromatographie gazeuse sans dérivation pour le dosage d'ECs dans les cellules tumorales humaines et les cultures de cellules humaines. Cette application est probablement possible en raison des fortes concentrations de ces endocannabinoïdes dans ces matrices [121].

1 .

 1 Des méthodes « conventionnelles » : a. La simple précipitation protéique b. L'extraction liquide-liquide (LLE) c. L'extraction en phase solide (SPE) 2. De « nouvelles » méthodes d'extraction : a. L'utilisation d'une deuxième colonne de purification (column-switching LC-MS/MS) b. La micro-SPE c. La microextraction par liquide magnétique (MLME)

  en technique d'extraction est la micro-extraction par liquide magnétique (MLME) qui utilise des liquides magnétiques à base de nanoparticules de Fe3O4. L'utilisation de ces nanoparticules diluées dans le toluène permet une adsorption physique des molécules de toluène, et offre alors la possibilité d'effectuer une extraction liquide -liquide. Après la désorption des molécules du mélange magnétique de toluène, une étape de dérivation avec du 4-DMABC est proposée pour augmenter la sensibilité. Selon les auteurs, cette méthode permet une extraction rapide, des résultats de quantification fiables, une prévention de l'isomérisation du 2-AG vers le 1-AG et une amélioration considérable de la sensibilité avec des limites des quantification de 2,7 ng/L pour l'AEA et 20 ng/L pour le 2-AG [133]. Conclusion Dans le domaine médical, le système endocannabinoïde (SEC) est donc sujet qui est d'actualité pour des raisons scientifiques et médiatiques (cannabis, cannabidiol, …). Toutefois, la connaissance précise de ses rôles en situation physiologique ou pathologique demeure imparfaite. Au-delà d'implications multiples du SEC, cette imperfection de compréhension repose surtout sur la difficulté analytique de son exploration. Les méthodes de dosages des endocannabinoïdes (et endocannabinoïdes-like) sont rares, souvent chronophages et non appliquées en routine biologique. Mais elles s'inscrivent dans la perspective du progrès des connaissances et de la compréhension système endocannabinoïde. Par ailleurs, il est possible qu'à terme, un endocannabinoïde trouve une place médicale en tant que biomarqueur (diagnostic et/ou suivi dans certaines pathologies), voire, en tant que principe actif de médicaments utilisables dans des indications bien spécifiques.

Figure 1 :

 1 Figure 1 : Structures chimiques du THC (A) et des endocannabinoïdes AEA (B) et 2-AG (C).

Figure 2 :

 2 Figure 2: Structures chimiques de l'OEA (A) et du PEA (B).

Figure 3 :

 3 Figure 3 : Synthèse des principales fonctions du système endocannabinoïde dans l'organisme et les variations de concentrations des endocannabinoïdes et des endocannabinoïdes-like observées dans les pathologies neurologiques, psychiatriques et hépatiques. [AEA : arachidonoylethanolamide ; 2-AG : 2-arachidonoylglycerol ; OEA: N-oleoylethanolamine ; PEA :N-palmitoylethanolamide ; SNC : système nerveux central ; SNP : système nerveux périphérique ; LCS : liquide cérébrospinal]